百泰派克生物科技BTP客户案例：利用多肽质谱鉴定确认P4Hα2和PDI成功表达
期刊：Pakistan Journal of Zoology；影响因子: 0.7361
原文链接：DOI: 10.17582/journal.pjz/2020.52.1.321.330
研究对象：毕赤酵母、脯氨酰4-羟化酶（P4H）
研究目的：rhP4H的表达和功能分析研究
研究手段：多肽质谱鉴定等
研究内容及结论：胶原蛋白脯氨酸残基的羟基化对胶原蛋白的三螺旋结构的稳定至关重要。脯氨酰4-羟化酶（P4H）是一种具有α2β2四聚体排列的酶，对胶原蛋白链中脯氨酸残基的翻译后羟基化起作用。P4H的α2β2四聚体中α亚基（P4Hα）包含催化位点，β亚基（PDI）维持α亚基的溶解性和活性。人体组织中P4H有三种α亚基，P4Hα1、P4Hα2和P4Hα3。有研究显示P4Hα2与I型、III型和IV型胶原蛋白的表达有关。该研究中，研究人员构建了pPICZαA-P4Hα2 和PHIL-PDI两个质粒转化至毕赤酵母中表达了一个有活性的人P4H四聚体（rhP4H）。Real-time PCR显示P4H基因在mRNA水平上表达。SDS-PAGE和western blotting分析显示，在毕赤酵母GS115细胞中成功实现了rhP4H的分泌表达。在含O2、Fe2+、α-酮戊二酸和抗坏血酸的体系中测试了rhP4H的催化活性，并通过UPLC-MS测定了脯氨酸的羟基化。结果表明，rhP4H仅羟基化Gly-X-Y结构特异性脯氨酸残基，不与游离脯氨酸发生反应。研究人员推测rhP4H通过选择脯氨酸残基一定程度的羟基化，可以被设计来调控重组胶原蛋白的结构特性，这将有助于创造具有特定功能用途的改造胶原蛋白。
利用质谱法对得到的重组P4Hα2和PDI单体进行分析，并通过MALDI-TOF MS肽图谱验证，该服务由北京百泰派克生物科技提供。结果表明P4Hα2和PDI成功表达。
参考文献：Cheng Y, Shi W, Xiao X, et al. New Strategy for Expression of Recombinant Human Prolyl-4-Hydroxylase in Pichia pastoris[J]. Pakistan Journal of Zoology, 2020, 52(1).
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