平行反应监测(PRM):原理、工作流程和应用
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唯一性(代表性肽段)
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良好离子化效率
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易裂解产生稳定产物离子的肽段
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基于全产物谱图+高分辨率,极大降低假阳性率
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适合检测低丰度蛋白或在高背景复杂基质(如血浆、尿液)中定量
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高分辨PRM平台:配备Thermo Orbitrap Exploris 480质谱系统
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标准化流程控制:样本处理-肽段筛选-内标引入-数据分析全流程标准化
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支持内标绝对定量:合成稳定同位素肽,适配临床验证需求
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可与DIA数据整合:为您的“发现→验证→转化”提供一站式解决方案
“平行反应监测”(Parallel Reaction Monitoring,PRM)是一种基于高分辨率质谱仪的靶向定量蛋白质组学技术,近年来在蛋白质功能研究、生物标志物验证及复杂样本背景中的靶向定量分析中得到了广泛应用。与多反应监测(MRM)技术相比,PRM在特异性、分辨率及抗干扰能力方面具有显著优势,适用于对目标肽段的高精度定量需求。
本文将从平行反应监测PRM的原理机制、实验流程、技术优势与典型应用场景四个方面进行全面解析,并介绍百泰派克生物科技在PRM蛋白质组服务方面的技术特色。
一、平行反应监测PRM的原理:精准识别目标肽段的“多维快照”
1、技术核心:全产物离子并行采集 + 高分辨精确质量数检测
PRM基于高分辨率、高精度的质谱仪(如Orbitrap或Q-TOF),对目标肽段的前体离子进行选择性碎裂,并并行采集所有产物离子信号。与MRM依赖特定离子对(transition)的方式不同,PRM可以在一次分析中获取完整的产物离子谱图,增强了数据的特异性和结果的可靠性。
这种“全谱段采集”方式使得PRM在复杂样本背景中具有更强的抗干扰能力,尤其适用于难以预测离子干扰的研究场景。
2、PRM vs. MRM:对比总结
二、平行反应监测PRM工作流程:从靶点设计到定量分析
1、靶点筛选与肽段设计
(1)来源于DDA或DIA发现阶段、文献或数据库(如PeptideAtlas、SRMAtlas)
(2)选择具有:
2、标准品选择(可选)
(1)可添加稳定同位素标记肽(SIS)用于绝对定量
(2)内标肽用于校正样本处理及质谱漂移误差
3、样本处理
通常为:蛋白提取 → 胰蛋白酶酶解 → 净化 → 加入内标 → 上机分析
4、质谱分析(Orbitrap PRM)
(1)使用高分辨率质谱仪(如Thermo Orbitrap Exploris)
(2)设定目标肽段的前体m/z,自动采集全产物离子谱
(3)获取高分辨率、高特异性的色谱峰图谱
5、数据处理
(1)主要使用 Skyline 软件
(2)通过多条产物离子的保留时间、峰型、一致性等进行验证和定量
(3)可输出相对定量/绝对定量结果
三、PRM的技术优势
1、高特异性
2、灵活性高
只需设定目标前体离子,所有碎片离子信息保留,便于后续挖掘和方法优化
3、无需开发Transition列表
与MRM相比,PRM不需繁琐的离子筛选流程,方法开发周期短
4、可与DIA互补
PRM适合做验证实验,而DIA适合发现,二者联用可形成高效验证闭环
四、PRM的典型应用场景
1、生物标志物验证
PRM常用于DDA或DIA筛选后靶点的验证,适用于对表达差异显著蛋白进行二次定量确认。
2、复杂样本中的靶点定量分析
在血浆、尿液、脑脊液等复杂生物样本中,PRM能够提供更高的特异性,有助于提升数据质量。
3、药效学与时间曲线研究
用于评价药物处理前后关键通路蛋白的动态表达。
4、合成生物学调控节点定量
精准量化代谢通路中关键酶表达水平,辅助调控策略设计。
百泰派克生物科技:PRM定量蛋白质组服务优势
百泰派克生物科技在PRM平台建设与技术服务方面,具备如下优势:
平行反应监测(PRM)是一种融合高分辨率质谱优势的靶向定量策略,兼具高灵敏、高特异与高稳定性,尤其适合于靶标蛋白验证与低丰度蛋白定量。其在生物标志物验证、临床研究和复杂样本分析中的价值不断显现。通过合理设计靶点、优化方法开发流程,并结合高性能平台,科研人员可以更稳定、准确地实现蛋白定量目标。百泰派克生物科技致力于为您提供高质量、可信赖的PRM定量解决方案,助力精准科研与转化应用的稳步推进。
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