定量乙酰化蛋白质组学介绍:适用样本、流程与交付内容
蛋白质乙酰化是一种广泛存在于真核生物中的可逆翻译后修饰(PTM),在调控染色质结构、代谢通路、细胞周期以及信号转导等生物过程中发挥关键作用。通过高分辨率质谱技术,系统性地鉴定和定量蛋白质乙酰化位点,为解析表观遗传机制和疾病发生机制提供了重要手段。本文将围绕定量乙酰化蛋白质组学适用样本类型、实验流程与数据交付内容三方面,全面介绍定量乙酰化蛋白质组学的关键要素,帮助科研人员更高效地开展相关研究。
一、定量乙酰化蛋白质组学是什么?
蛋白质乙酰化修饰主要发生在赖氨酸残基(Lysine, K)上,调节蛋白质的稳定性、亚细胞定位和与其他分子的相互作用。传统Western blot检测能力有限,而定量乙酰化蛋白质组学则通过抗体富集结合LC-MS/MS技术,支持大规模、全局性修饰位点的定性+定量分析。
1、常见定量策略包括:
(1)标记方法:如TMT(Tandem Mass Tags)、iTRAQ,适用于多组样本并行分析。
(2)非标记法(Label-free):无需标记,适用于样本量有限或预算受限场景。
二、定量乙酰化蛋白质组学适用样本类型
定量乙酰化蛋白质组学可适用于多种生物样本,涵盖从基础研究到临床转化的多个研究方向:
1、常见样本类型及应用场景如下:
2、定量乙酰化蛋白质组学样本处理建议:
(1)推荐使用新鲜样本或-80°C冷冻保存;
(2)避免反复冻融,最大程度保留修饰状态;
(3)使用含去乙酰化酶抑制剂的裂解液,以防修饰丢失。
百泰派克生物科技已建立多种样本类型的标准化处理方案,确保乙酰化修饰的完整性和实验结果的可比性。
三、定量乙酰化蛋白质组学实验流程概览
定量乙酰化蛋白质组学实验主要包括四大步骤,具体如下:
1、蛋白提取与酶解
(1)样本裂解缓冲液中添加抑制剂(HDACi),防止修饰损失;
(2)蛋白定量后,使用胰蛋白酶进行充分酶解。
2、肽段纯化与修饰富集
(1)采用高亲和力的抗乙酰赖氨酸抗体进行修饰位点富集;
(2)洗脱并脱盐处理,得到富集肽段。
3、液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)分析
(1)采用高分辨率质谱平台,如Orbitrap Exploris 480;
(2)根据项目需求选择DDA或DIA模式进行数据采集。
4、数据分析与定量
(1)使用MaxQuant、PD等软件进行肽段鉴定与定量;
(2)乙酰化位点水平的统计分析(fold change、p值);
(3)通路富集(KEGG、GO)、聚类热图等可视化展示。
四、定量乙酰化蛋白质组学数据交付内容
百泰派克生物科技为确保科研人员顺利使用数据,提供完整、规范的交付资料:
1、原始数据
(1)质谱原始文件(.raw);
(2)参考数据库(FASTA)等基础信息。
2、定量结果表格
(1)乙酰化位点及对应蛋白的定量表达矩阵;
(2)包含p值、fold change、肽段信息等。
3、生物信息学分析报告
(1)GO、KEGG、Pfam等功能注释与通路分析;
(2)聚类分析、差异位点筛选等统计结果;
(3)丰富的图件:火山图、热图、通路网络图等。
4、PDF实验总结报告
(1)实验流程与参数记录;
(2)质控指标与分析结论;
(3)数据使用建议。
5、可选个性化交付
(1)蛋白互作网络构建(PPI);
(2)多组学联合分析(转录组+蛋白组+修饰组);
(3)文章图表润色与技术支撑。
五、定量乙酰化蛋白质组学应用方向与研究案例
1、表观遗传机制研究:乙酰化修饰与组蛋白调控、染色质开放性等相关研究
2、代谢重编程分析:线粒体蛋白乙酰化在氧化磷酸化过程中的调节作用
3、肿瘤及免疫研究:免疫检查点、炎症反应中乙酰化修饰的动态变化
4、药物靶点验证:评估小分子药物对乙酰化酶类活性或靶点修饰的影响
六、百泰派克生物科技的服务优势
1、技术平台先进
(1)配备Orbitrap Exploris 480、QE HF等高端质谱仪器
(2)兼容DIA、DDA、PRM等多种数据采集模式
2、服务流程专业
(1)从样本制备、质谱分析到生信挖掘全流程覆盖
(2)严控数据质量、保证分析重复性
3、数据解读能力强
(1)配套可视化图表支持论文撰写
(2)提供分析指导和图注解释,助力成果快速发表
4、响应及时、交付高效
(1)实验周期可控,适配项目申报与临床时间节点
(2)支持项目加急处理与阶段性交付
定量乙酰化蛋白质组学已成为研究细胞表观调控机制的重要工具。通过高分辨率质谱与富集技术的结合,科研人员可以系统性识别关键乙酰化位点,揭示疾病发生发展中的调控网络。百泰派克生物科技依托先进质谱平台与标准化流程,致力于为广大科研工作者提供可靠、高效、可发表的数据支持。如您有相关研究需求,欢迎联系我们的技术团队获取方案建议!
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