iTRAQ定量技术:原理、优势与应用
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标记过程:iTRAQ试剂由一个报告基团、一个平衡基团和一个肽段反应基团组成。通过胺反应基团,iTRAQ标签可与肽段的N-末端和赖氨酸残基共价结合。
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质谱检测:在MS/MS分析阶段,标记的肽段经过碰撞诱导解离(CID)后,释放出不同质量的报告离子。通过测量这些报告离子的强度,能够推算出不同样本中对应蛋白质的相对丰度。
在蛋白质组学研究中,精确、灵敏地比较不同样本间蛋白质丰度变化,是揭示生物学机制的关键。iTRAQ(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)作为一种基于质谱的多重定量技术,因其高通量、准确性和广泛适用性,成为生命科学领域的重要工具。本文将系统介绍iTRAQ技术的原理、主要优势及应用领域。
一、iTRAQ定量技术的基本原理
iTRAQ是一种同位素标记技术,主要通过对不同样本的肽段进行化学标记,使得这些肽段在质谱初步分析时质量相同,但在碎裂过程中释放出特异性的报告离子(reporter ions),从而实现多重样本的相对定量。
二、iTRAQ定量技术的主要优势
1、多重样本同时定量
iTRAQ支持多达8组或更多样本的同步标记与分析,大幅提高了实验效率,尤其适合复杂生物体系,如疾病进程分析或多时间点动态研究。
2、高定量精度和灵敏度
iTRAQ利用统一质谱分析流程和内源性对照,能够实现低丰度蛋白质的准确检测,有效减少技术偏差。
3、适用范围广
iTRAQ适用于细胞、组织样本及各类体液,结合高分辨率质谱平台,可进一步提升鉴定深度与定量准确性。
三、iTRAQ定量技术的应用领域
1、疾病机制研究
iTRAQ在肿瘤、心血管疾病及神经系统疾病研究中广泛应用,用于筛选差异表达蛋白,揭示疾病发生发展的分子机制。
2、生物标志物发现
通过比较患者与对照组样本的蛋白质表达差异,iTRAQ助力早期诊断标志物或治疗靶点的筛选,为精准医学提供基础数据支持。
3、药物作用机制解析
iTRAQ可用于评估药物干预前后样本中蛋白质表达变化,揭示药物作用途径及潜在副作用机制。
4、植物与微生物组学研究
iTRAQ也被广泛应用于农业科学和环境微生物组学研究,推动基础科学发展。
随着蛋白质组学研究的不断深入,iTRAQ定量技术凭借其多重定量、高精度的独特优势,已成为揭示生命科学问题的重要手段。未来,随着质谱技术与数据分析方法的持续进步,iTRAQ将在更多领域展现巨大的应用潜力。百泰派克生物科技致力于提供高质量的定量蛋白组分析服务,持续以专业与创新,助力您的科研探索之路。
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