如何通过高分辨质谱检测组蛋白乳酰化修饰？
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DDA（Data Dependent Acquisition）：探索性研究使用；
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DIA / PRM（Parallel Reaction Monitoring）：用于靶向定量分析。
- MS1分辨率 ≥ 60,000
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MS2分辨率 ≥ 30,000
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动态排除：30s以上
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离子源模式：正离子（ESI+）
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乳酰化修饰（Kla）：+72.0211 Da
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开启多种可变修饰选项（乙酰化、甲基化等）以比较特异性
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合成肽验证特异性
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Western blot / IP-MS验证抗体特异性
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高分辨Orbitrap质谱平台，支持DIA/PRM多模式采集；
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修饰位点级别的高覆盖鉴定与定量分析；
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优化的富集方案 + 严格质控标准，确保数据稳定性；
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提供生信分析支持：富集通路、调控网络、交叉修饰图谱等。
组蛋白乳酰化（Histone lactylation）是一种新型的翻译后修饰，其发现拓展了代谢物在表观遗传调控中的角色。由于其修饰丰度低、结构易与乙酰化等其他修饰混淆，必须依赖高分辨质谱（High-Resolution Mass Spectrometry, HRMS）才能进行精准检测与定性定量分析。
一、背景简介：什么是组蛋白乳酰化？
组蛋白乳酰化是2019年由Zhang等人在《Nature》首次报道的新型赖氨酸修饰，来源于乳酸代谢产物 lactyl-CoA。该修饰影响染色质结构及基因表达，尤其在缺氧、炎症、肿瘤代谢重编程等生理/病理过程中表现活跃。
乳酰化与乙酰化等常见修饰具有以下不同特点：
二、检测乳酰化为何必须依赖高分辨质谱？
1、组蛋白乳酰化的几个检测挑战：
（1）修饰差异小：乳酰化（+72.0211 Da）与乙酰化（+42.0106 Da）仅相差30 Da，低分辨质谱易混淆。
（2）修饰位点复杂：组蛋白富含赖氨酸残基，多个潜在修饰位点共存，需高分辨率区分异构体。
（3）丰度极低：在天然样本中乳酰化丰度远低于乙酰化/甲基化等，需要灵敏度高的检测平台。
2、高分辨质谱（如Orbitrap Fusion Lumos、timsTOF Pro 2）具备：
（1）ppm级质量精度：能精准分辨乳酰化与其他近似修饰；
（2）高扫描速度：支持Data-Independent Acquisition（DIA）或PRM等策略；
（3）高灵敏度：适用于低丰度修饰靶点的检测。
在百泰派克生物科技，我们采用Orbitrap Exploris 480联用NanoLC系统，专为低丰度组蛋白修饰开发专属富集与质谱方法，确保数据重现性与深度。
三、组蛋白乳酰化检测流程详解
1、样本制备
（1）来源：细胞核提取物、动物组织、临床样本等；
（2）组蛋白提取：使用酸萃取法（例如0.4N H2SO4），特异性富集组蛋白；
（3）还原/烷基化：处理二硫键；
（4）酶解策略：采用Trypsin/LysC等多酶联合，提升乳酰化肽段覆盖度。
2、修饰肽段富集
（1）抗乳酰化抗体富集（Immunoaffinity）：市售乳酰化赖氨酸抗体（例如PTMScan®）可用于IP级别富集；
（2）替代方法：化学衍生标记或HILIC分级策略。
3、LC-MS/MS 分析
（1）平台建议：Orbitrap Exploris、Fusion Lumos、QE HF等均可胜任。
（2）分析模式：
（3）关键参数：
4、数据分析
（1）数据库搜索引擎：MaxQuant、pFind、MSFragger等
（2）修饰设置：
（3）定量方式：LFQ、TMT 或 PRM/Parallel Reaction Monitoring
（4）结果验证：
四、常见问题解析（FAQ）
Q1：乳酰化修饰是否容易被乙酰化误判？
是。若仪器分辨率不足，或数据库未设定乳酰化质量偏移量，容易将乳酰化肽段错误识别为乙酰化。因此高分辨率和精准质量匹配非常关键。
Q2：是否必须进行富集？
建议富集。尽管高分辨仪器可检测低丰度肽段，但组蛋白乳酰化修饰非常稀有，未富集可能难以检出。
Q3：可以通过DIA方法分析乳酰化吗？
可以。DIA具备高通量与可重分析性，适合系统性研究。我们推荐使用PRM或DIA进行乳酰化修饰的靶向定量。
五、百泰派克生物科技的优势服务
在百泰派克生物科技，我们基于先进质谱平台和深厚的蛋白组学经验，为您提供一站式组蛋白乳酰化修饰检测服务：
组蛋白乳酰化修饰正逐渐成为表观遗传研究的热点，它连接代谢状态与染色质结构的桥梁角色，尤其适合研究肿瘤免疫、慢性炎症、干细胞命运等方向。通过高分辨质谱，科研人员可以更精准地探测这一微小而关键的修饰。如果您正在开展相关课题，欢迎联系百泰派克生物科技，我们将为您量身打造乳酰化修饰检测方案，助力科学发现！
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