如何用无标记定量技术精准捕捉乳酰化蛋白？
近年来，乳酰化（Lactylation）作为一种新型的蛋白质翻译后修饰（PTM），在代谢调控、炎症应答和肿瘤发生等生物过程中展现出重要作用。由于其发生频率低、修饰位点多样且缺乏专一性抗体，乳酰化蛋白的研究面临技术瓶颈。为了实现对乳酰化蛋白的精准捕捉与定量，无标记定量（Label-Free Quantification, LFQ）技术正在成为主流选择。
一、乳酰化：连接代谢与表观遗传的新桥梁
乳酰化是一种赖氨酸残基的翻译后修饰，其来源于细胞内乳酸（Lactate）的积累。最早于2019年被发现，它标志着代谢中间产物可以直接调控基因表达，为“代谢-表观遗传”交叉研究打开新局面。研究表明，乳酰化在巨噬细胞炎症响应、肿瘤代谢重编程、干细胞分化等过程中发挥调控功能。例如，乳酸诱导的组蛋白乳酰化可上调促炎基因表达，提示其在肿瘤免疫微环境中可能具有关键作用。
二、为什么选择无标记定量技术研究乳酰化蛋白？
与TMT、iTRAQ等标记型定量方法相比，无标记定量技术在研究低丰度修饰蛋白（如乳酰化蛋白）时具有以下显著优势：
1、避免样品复杂操作，适合珍贵样本
乳酰化修饰通常在应激、缺氧等特殊生理条件下发生，样本获取难度大，数量有限。无标记定量无需进行稳定同位素或化学标记，减少样品损耗和实验误差，更适合珍贵组织样本或小鼠模型组织的研究。
2、更高的通量与数据覆盖率
基于高分辨质谱平台（如Orbitrap Exploris 480）的无标记定量技术，能够实现对上万个肽段的深度扫描与精准定量，利于系统解析乳酰化修饰的蛋白谱图及其动态变化。
3、灵活整合富集策略，提升检测灵敏度
乳酰化修饰的丰度较低，需结合特异性抗体富集或亲和纯化技术。无标记定量策略可以灵活整合富集前后的蛋白组学分析，精准识别修饰位点并量化表达水平差异。
三、实验流程优化：精准捕捉乳酰化蛋白的关键
在百泰派克生物科技的蛋白组学平台中，我们构建了一套针对低丰度PTM的无标记定量流程，适用于乳酰化等新兴修饰的研究。以下是核心实验策略：
1、样本裂解与蛋白提取
采用高效裂解液（含去磷酸酶、去乙酰化酶与去乳酰化酶抑制剂），确保蛋白修饰状态的稳定性。
2、蛋白酶解与肽段纯化
使用Trypsin或Lys-C酶进行充分酶解，结合C18固相萃取净化肽段，去除盐离子及干扰物质。
3、乳酰化修饰肽段富集
应用商业化抗-乳酰赖氨酸抗体（Anti-Kla）进行免疫亲和富集，提高乳酰化肽段的检出率。
4、LC-MS/MS无标记定量分析
基于高分辨率Orbitrap MS平台，结合DDA或DIA采集模式，构建深度蛋白组图谱。配套MaxQuant、Spectronaut等分析软件进行定量计算和统计分析。
5、数据挖掘与功能注释
通过GO、KEGG、PPI网络等生物信息学工具解析乳酰化蛋白的功能富集、生物通路及关键调控节点。
四、百泰派克生物科技的优势服务
1、一站式乳酰化蛋白组解决方案：从样本制备到数据解读，全面支持低丰度修饰研究；
2、高灵敏质谱平台：Orbitrap Exploris 480 / timsTOF Pro 2，支持DIA、DDA双模式采集；
3、专业PTM富集试剂体系：定制化乳酰化肽段富集方案，兼顾灵敏度与特异性；
4、深度生信支持：个性化通路分析、转录调控网络挖掘、可视化报告交付。
乳酰化作为代谢与表观遗传学交叉的核心节点，其研究价值正在快速显现。无标记定量技术以其灵活、高通量、低样本需求的特点，为乳酰化蛋白的精准捕捉提供了强有力支持。在百泰派克生物科技，我们持续探索并优化蛋白组学技术平台，助力科研人员从修饰谱图走向生物机制，为乳酸信号的研究提供可靠的技术保障。如您有关于乳酰化蛋白组或其他PTM研究的技术需求，欢迎联系百泰派克生物科技，我们将为您提供专业建议与个性化解决方案。
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