Olink PEA 技术原理详解与数据分析流程
在多重蛋白检测领域，Olink基于独特的Proximity Extension Assay（PEA）技术，成为临床队列研究和生物标志物发现的主流平台。Olink PEA 技术结合了双抗体特异识别、核酸标签和高灵敏度扩增检测，既保证检测通量，又兼顾定量准确性。本文将系统解析Olink PEA 技术的工作原理，并介绍Olink常用的数据分析流程，帮助科研人员更高效地理解和应用该技术。
一、Olink PEA 技术原理
1、Olink PEA 技术核心理念
（1）PEA利用成对的抗体探针，每个探针连接一条独特的寡核苷酸标签；
（2）当两条探针同时结合同一目标蛋白时，寡核苷酸处于近距离，可通过DNA聚合反应形成可扩增序列；
（3）该序列随后通过qPCR或NGS检测，实现高灵敏度、低背景的信号输出。
2、Olink PEA 技术优势
（1） 高特异性：需双抗体同时结合，显著降低非特异信号；
（2） 高通量：单反应可覆盖数百至数千种蛋白；
（3） 低样本需求：每次分析仅需1-3 μL血浆或血清；
（4） 宽动态范围：覆盖10个数量级的蛋白浓度。
3、Olink PEA 检测平台分类
（1）基于qPCR的Target或Focus面板，适合几十至几百蛋白的中低通量研究；
（2）基于NGS的Explore及Explore HT平台，支持3,000+蛋白的高通量分析。
二、PEA 实验流程概述
1、Olink PEA 技术样本处理
（1） 血清、血浆或其他体液按标准流程预处理；
（2） 严格控制批间差异，保证下游分析一致性。
2、Olink PEA 技术反应步骤
（1）加入抗体探针对并结合目标蛋白；
（2）近距离的寡核苷酸标签通过DNA聚合生成扩增模板；
（3）模板扩增并转化为可读信号（qPCR或NGS）。
3、Olink PEA 信号读出
（1） qPCR方式：通过Cq值实现相对定量；
（2） NGS方式：通过测序标签计数（UMI校正）实现更宽动态范围和高通量。
三、Olink 数据分析流程
1、原始数据处理
（1）从qPCR或NGS读出生成Cq或reads矩阵；
（2）去除技术噪声（如空白孔和内控）。
2、NPX（Normalized Protein eXpression）计算
（1） Olink标准算法对每个蛋白信号归一化，消除批次效应；
（2） 输出对数化相对表达值（NPX），便于样本间比较。
3、下游分析
（1）差异分析：组间比较寻找候选生物标志物；
（2）通路富集：结合KEGG/Reactome分析功能网络；
（3）多组学整合：与转录组、代谢组数据联合分析。
四、Olink PEA 技术应用与百泰派克生物科技的支持
1、适用研究场景
（1） 队列研究：大规模人群样本的蛋白表达谱分析；
（2） 药物研发：药效、毒理及机制研究中的生物标志物筛选；
（3） 临床转化：早期诊断标志物验证。
2、百泰派克生物科技的服务优势
（1）支持Olink Target、Explore与Explore HT全系列平台；
（2）从实验设计、质控到生物信息学分析提供一站式服务；
（3）输出可直接用于论文发表与项目申报的数据结果。
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