揭秘MALDI-TOF:从理论到实践的分子量判断方法
在生物制药分析领域,对药物的结构和功能进行准确分析是至关重要的。如何准确地确定一个分子的质量,是这个过程中必不可少的一环。在众多技术中,基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF,Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)以其高效且准确的分析性能,成为了实验室里不可或缺的工具。那么,MALDI-TOF到底是如何判断分子量的呢?让我们深入探索一下。
一、基本理论
MALDI-TOF的核心在于利用激光和基质来解吸和电离样品,再通过飞行时间的测量来确定分子量。当被激光照射后,样品分子与基质分子之间的能量转移导致样品分子电离并被解吸进入飞行管。这些带电的分子在同样的电场作用下,以不同的速度飞向检测器。由于飞行时间和质量成反比,所以我们可以通过测量这个时间来确定分子的质量。
二、实践操作
1.样品准备:
在MALDI-TOF分析过程中,样品和基质的选择至关重要。样品需要与基质有良好的相容性,而基质需要有足够的激光吸收性以促进样品的电离。通常,样品和基质会以合适的比例混合并在目标板上制备成微晶。
2.飞行时间测量:
将目标板放入质谱仪后,激光照射样品,使样品分子电离并被解吸入飞行管。这些带电的分子在同样的电场推动下,向检测器飞去。由于重的离子飞行慢,轻的离子飞行快,所以分子到达检测器的时间不同,即飞行时间不同。
3.数据处理:
通过飞行时间测量得到的质谱信号需要经过数据处理。首先需要对信号进行峰识别和定量,接下来,通过查找质谱数据库来识别已知的分子,对于未知分子,可以通过飞行时间与已知分子的飞行时间进行对比来推断其质量。
MALDI-TOF不仅准确高效,而且可以应用于广泛的样品,包括蛋白质、多肽、糖类和核酸等,对于生物制药领域的分析和质量控制具有重要意义。无论是在研究还是生产环节,它都是一种强有力的分析工具。然而,使用MALDI-TOF也需要掌握一定的技巧和经验,包括样品的制备,基质的选择,数据的解读等。只有这样,才能充分发挥其在分子质量测定中的潜力。
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