福林酚法测定蛋白含量标准曲线

福林酚法(Lowry method)，又称为洛瑞法，是一种常用的测定蛋白质总量的生化分析方法。该方法于1951年由Oliver H. Lowry等人提出，它基于蛋白质与酚及铜离子反应产生的复合物在特定波长下的吸光度，从而推算出蛋白质的浓度。

 

福林酚法的测定原理是蛋白质的芳香酮肽键和酚氧基及铜离子形成一个有色络合物。此络合物在750 nm处的吸光度与蛋白质浓度成正比。这是一个基于Beer-Lambert定律的分析方法。

 

制作标准曲线

在实验室中，我们通常会以已知浓度的蛋白质溶液（如牛血清白蛋白BSA）为标准，制备一系列不同浓度的标准溶液，然后分别测定其吸光度，以制作标准曲线。

1.将已知浓度的BSA溶液按比例稀释，制备一系列标准溶液。浓度通常选择在实验测定范围内，如0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 mg/ml等。

2.将每个标准溶液与福林酚试剂混合，静置一段时间均匀反应。

3,在750 nm处测定各个标准溶液的吸光度。

4.以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，制作标准曲线。

 

在实验中，我们一般假设吸光度与浓度之间的关系是线性的。然而，在浓度过高或过低的情况下，这种关系可能会偏离线性。因此，选取合适的浓度范围，以确保测定的准确性。福林酚法是一种常见且重要的测定蛋白质总量的方法。通过制作标准曲线，我们可以准确、快速地测定未知浓度的蛋白质溶液。在生物化学、分子生物学、免疫学等领域，福林酚法具有广泛的应用。

 

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