Bradford 蛋白浓度

Bradford法，也称为考马斯亮蓝法，是一种用于快速、简便测定蛋白质浓度的方法。该方法基于蛋白质与染料（考马斯亮蓝G-250）的结合，通过比色法实现蛋白质浓度测定。

考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）在游离状态下呈棕红色，最大光吸收度在490nm左右。在酸性溶液中，蛋白质中的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基与考马斯亮蓝G-250结合形成蓝色络合物，该络合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质浓度成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

图1 Bradford法测定蛋白浓度原理

Bradford法的具体步骤如下：

1、试剂配制

将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇中，然后加入100mL 85%磷酸，随后用蒸馏水补充至200mL。（4℃保存，至少可以保持稳定6个月）

2、样本制备

使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品。例如测定抗体时，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug-150ug/100μL之间绘制标准曲线。

3、样品测定

将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同。向100μL样品中加入1mL的Bradford试剂，用高速搅拌器搅拌均匀。5-30min内测量混合溶液在595 nm处的吸光度。

4、蛋白浓度分析

将标准蛋白品吸光度数据导入Excel做散点图，得出标准曲线公式。将未知蛋白吸光度数据导入标准曲线公式可得未知蛋白浓度。

百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商