基于SILAC的定量蛋白质组学

细胞培养下稳定同位素代谢标记（(Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture，SILAC）是在细胞培养过程中，利用稳定同位素标记的氨基酸结合质谱技术，对蛋白质组进行定量分析的一种技术。它的标记流程主要包括以下步骤：

• 培养基准备：采用含有轻、重同位素型必需氨基酸（主要是赖氨酸和精氨酸）的培养基进行细胞培养。

• 细胞培养：经过连续数代的细胞传代培养（一般培养5-6代），细胞内的蛋白质得以被同位素稳定标记。在这一过程中，标记的氨基酸通过细胞的正常代谢途径，自然地整合到新生的蛋白质分子中，从而确保了标记的均匀性和稳定性。

• 蛋白质分离：通过凝胶电泳或色谱分离等方法将等量混合的标记和未标记的蛋白质进行分离，以便后续对特定蛋白质进行分析。

• 酶解：将蛋白质酶解成较小的肽段，以便质谱分析。这一步骤有助于增加分析的灵敏度和分辨率。

• 质谱分析：利用串联质谱技术对肽段进行分析。根据一级质谱和二级质谱数据，如质谱峰间距、强度比和峰面积大小等，实现蛋白质的定性和定量分析。通过比较同位素标记和未标记的肽段，可以确定蛋白质的相对含量变化。

图1 SILAC技术实验流程

SILAC技术因其高精度、高标记率以及优异的重复性，已成为一种常用的定量蛋白质组学方法。近年来，该技术在科研领域得到了广泛应用，为研究者们提供了深入探索蛋白质功能与调控机制的有力工具。百泰派克生物科技BTP采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台，Orbitrap Fusion质普平台，Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供基于SILAC的定量蛋白质组学分析服务，此外还有体外标记的-iTRAQ，TMT技术，适用于不同的样本和场景，可满足您不同的需求。

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