外周血单个核细胞（PBMC）单细胞测序
外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMC）是人体外周血中一种高度异质的细胞群体，由于其获取便捷、信息丰富，PBMC成为研究人类免疫系统状态、疾病发生发展以及个体化治疗反应的重要窗口。传统高通量测序技术（如bulk RNA-seq）只能获得细胞群体的平均表达水平，容易掩盖不同细胞之间的差异性。而在真实的生物体系中，即便是表面相同的一类细胞，其基因表达、代谢状态乃至发育轨迹也可能千差万别。外周血单个核细胞（PBMC）单细胞测序打破了这一“平均”限制，允许我们以单个细胞为单位，获取其转录组、基因组、表观遗传组、蛋白质组等分子信息，开启“每个细胞都是独特研究对象”的时代。这一技术正成为肿瘤免疫、感染性疾病、自身免疫病等多个领域的研究热点。
一、PBMC具备的研究优势
1、非侵入性样本来源：通过静脉采血即可获得，无需进行组织穿刺。
2、高度代表性免疫细胞群体：反映免疫系统动态变化，适用于纵向监测。
3、适合构建“液体活检”模型：可替代实体组织样本进行免疫微环境解析。
二、单细胞测序带来的相关突破
相比于传统的bulk RNA-seq技术只能反映细胞群体的平均表达，难以捕捉细胞间的异质性。而单细胞RNA测序技术能够对成千上万个PBMC进行逐个转录组分析，从而实现：
1、识别罕见细胞亚群（如衰老T细胞、炎症相关单核细胞）
2、动态追踪细胞谱系与发育轨迹
3、揭示疾病相关的免疫失衡机制
4、发现新型免疫治疗靶点或生物标志物
三、PBMC单细胞测序的技术流程
1、样本采集与PBMC分离
使用抗凝血管采集外周血样本后，常通过Ficoll密度梯度离心分离PBMC。关键在于保持细胞活性，避免激活或凋亡。
2、 单细胞捕获与建库
目前主流方案包括10x Genomics Chromium平台，其微流控系统可实现高通量细胞包裹与barcode标记。每个细胞被独立标记并转录为cDNA，再进行文库构建。
3、 高通量测序与数据处理
通过Illumina平台进行高通量测序后，使用Cell Ranger等工具进行数据质控、UMI去重、细胞聚类、差异基因分析等。
4、生物信息学分析与可视化
进一步可借助Seurat、Scanpy等分析工具，对PBMC亚群进行注释、轨迹推断、功能富集分析等，为后续的临床关联研究奠定基础。
四、应用场景：PBMC单细胞测序在多种疾病中的价值
1、肿瘤免疫研究
PBMC能够反映肿瘤患者全身免疫状态，通过单细胞测序可以识别免疫耗竭T细胞、调节性T细胞（Tregs）等关键亚群，为免疫治疗反应预测提供新思路。
2、 自身免疫疾病
如系统性红斑狼疮（SLE）等疾病中，PBMC的单细胞图谱揭示异常B细胞活化、单核细胞炎症表型等机制，为新型免疫抑制靶点筛选提供依据。
3、感染与疫苗应答
新冠疫情中，PBMC单细胞研究揭示了感染者与接种疫苗人群中T细胞应答的差异，推动精准疫苗设计。
现如今，PBMC样本的单细胞分析仍面临挑战：细胞状态变化快：需要尽快处理、保持低温；细胞量限制分析深度：稀有亚群可能被遗漏；数据分析门槛高：依赖多种算法整合与高性能计算。在百泰派克生物科技，我们通过严控前处理流程、优化细胞捕获策略，并配套生信一对一解析服务，最大限度提升数据质量与解读效率，助力科研客户高效推进PBMC相关项目。
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