二甲基标记
二甲基标记是一种高效的化学标记方法，它广泛应用于定量蛋白质组学研究。该方法基于肽段的N-端和赖氨酸残基侧链的胺基化学修饰，利用甲醛和氰基硼氢化钠在碱性条件下进行还原胺化，实现肽段的轻、中、重三种不同质量标记。该技术的主要优势在于标记过程简便、标记效率高、适用于复杂生物样本，并能够与液相色谱-串联质谱技术联用，实现蛋白质的高通量、精准定量分析。在蛋白质组学研究中，二甲基标记可用于比较不同样本中的蛋白质表达水平，如疾病研究、药物作用机制探索及细胞信号通路解析等。相较于其他定量方法（如SILAC、iTRAQ、TMT等），这项技术具有成本低、通量高、实验流程相对简单的优势，特别适用于大规模蛋白质定量分析。近年来，随着质谱技术的发展，二甲基标记已成为蛋白质定量研究的工具，为生物医学研究提供了高效可靠的定量策略。尽管二甲基标记在蛋白质组学定量研究中表现优异，但其仍然存在一定的局限性。比如，由于二甲基标记依赖于赖氨酸残基，赖氨酸含量低的蛋白质可能难以实现准确的定量，影响数据的全面性。此外，在极高质量精度要求的实验中，不同同位素标记的二甲基基团可能存在轻微的保留时间漂移，影响定量精度。
一、二甲基标记的原理
二甲基标记的基本原理是基于胺基的还原胺化反应。在碱性条件下，甲醛与肽段的N-端和赖氨酸残基的ε-胺基反应形成不稳定的亚胺（Schiff碱），随后在氰基硼氢化钠的作用下发生还原反应形成稳定的二甲基化修饰。通过选择不同同位素标记的甲醛（¹²CH₂O、¹³CD₂O等）可以得到轻（Light）、中（Medium）和重（Heavy）三种不同质量的标记肽段，使不同样本在同一质谱分析中区分并通过质谱信号强度比值进行蛋白质定量分析。与其他化学标记方法相比，二甲基标记的标记位点高度可控，通常不会影响肽段的离子化效率和质谱行为。此外，该方法可以适用于复杂的蛋白质样本，包括组织、血浆和细胞裂解液，使其在蛋白质组学研究中具有较强的适用性。
二、二甲基标记的实验流程
二甲基标记的实验流程主要包括样本制备、蛋白酶解、化学标记、样本混合及质谱分析五个关键步骤。
1、样本制备：从细胞、组织或生物体液中提取蛋白，并通过超声破碎、离心等方法去除不溶性杂质。
2、蛋白酶解：利用胰蛋白酶（Trypsin）或Lys-C等酶将蛋白水解为肽段以保证二甲基标记的特定位点（N-端和赖氨酸侧链）暴露。
3、二甲基标记：在碱性条件下加入不同同位素标记的甲醛和氰基硼氢化钠，对肽段进行化学修饰。
4、样本混合：将不同标记的样本等比例混合以保证质谱分析的准确性。
5、液相色谱-质谱分析（LC-MS/MS）：利用高效液相色谱分离肽段并通过质谱检测不同同位素标记肽的相对丰度，实现定量分析。
百泰派克生物科技提供高质量的基于SILAC/Dimethyl标记的定量蛋白组分析服务，致力于为科研人员提供高效、精准的蛋白质定量分析方案。我们的实验团队严格控制标记条件，确保高标记效率和数据可靠性。
百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商
相关服务：
How to order?
