磷酸化质谱图怎么看
质谱除了被用来确定单一蛋白质的磷酸化修饰状态,还被用来确定带有磷酸化修饰的所有蛋白质的广泛数据集,那么磷酸化质谱图怎么看?在磷酸化蛋白质谱(如MS/MS,LC-MS/MS)分析中,先使试样中各组分电离生成不同荷质比的离子,然后经加速电场的作用生成离子束。在质量分析器的磁场作用下,质荷比相同的离子会被聚焦到同一点上,不同质荷比的离子聚焦于不同点上,因此获得区分不同质荷比离子的质谱图。与未经修饰的肽段相比,磷酸基团修饰的肽段在相对分子质量上就会增加79.966,由此在质谱图中能够与未修饰肽段进行区分。通过质谱检测分析,可以得到的磷酸化质谱肽段信息包括:修饰蛋白的名称、磷酸化修饰肽段的序列、修饰肽段上被修饰的具体氨基酸残基、残基定位可信度、假阳性率,以及被修饰肽段位点的分布情况(位点)等信息。
此外,还可根据定量比值频数分布图、火山图、PCA图、聚类heatmap和折线图等图表信息进行质谱图信息判断。定量比值频数分布图中大部分肽段比值呈现对称分布且符合统计学规律,则质谱结果正常。利用火山图统计蛋白表达量变化差异的统计学t检验p值,p值越小则蛋白表达量差异越显著。PCA图可从总体上反映组内样品的离散程度和组间样品的差异性。聚类heatmap和折线图则可对样本的聚类结果进行分析,并检验筛选的目标肽段的合理性。以上数据及图表均可用于分析磷酸化质谱图的结果分析。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台,Orbitrap Fusion质谱平台,Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC,推出磷酸化定量蛋白组分析服务技术包裹。只需要将您的实验目的告诉我们并寄送样品,百泰派克生物科技负责项目后续,包括蛋白提取、蛋白酶切、磷酸化肽段富集、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析所有事宜。
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