hcp检测流程

宿主细胞蛋白（host cell protein，HCP）是一类异质性的蛋白污染，是生物制品中无法避免的一类杂质，可能在重组发酵过程中产生，或是从外源物质引入。即使进行多次复杂的分离纯化，HCP也可能与产品共同纯化，或随产品而分离，因此需要对原料产品和下游纯化过程（DSP）中间体中的HCP进行表征和量化。在此之前，需要预先对HCP检测流程进行了解与完善，HCP检测流程主要分为以下三大部分。

抗体的制备和标准品的制备：抗体的制备可采用两种方案，一种是将宿主细胞按照已定的生产工艺进行发酵和纯化，然后将获得的HCP蛋白免疫动物制备抗体；另一种方案是将工艺获得宿主细胞原液去除抗体后再免疫动物。标准品的制备可使用空载质粒转化到宿主细胞，按已定的生产工艺进行发酵纯化。

下游纯化：通常，从培养的细胞系统中表达的重组产物的回收开始于细胞培养液（HCCF）的收获，随后是一系列下游加工（DSP）步骤。这些DSP步骤不仅允许产品回收，而且还强调去除与工艺相关的杂质（包括 HCP）以及与产品相关的杂质（如聚集体）。最终得到重组蛋白HCP水平小于100 ppm、高分子量免疫原性聚集体小于5%的聚集体。

HCP表征和量化：HCP表征和量化检测应用最为广泛的方法是酶联免疫吸附分析法（ELISA）；随着蛋白组学技术的发展，与ELISA相对的正交方法，如双向荧光差异电泳技术（2D-DIGE）、液质联用（LC-MS）等质谱技术可用于HCP的表征分析，且能更客观、更全面地验证HCP ELISA方法检测的特异性和实际HCP覆盖率。现以2D-DIGE技术为例对HCP检测步骤进行概述：取两块相同的胶对同一个已纯化好的HCP样品进行二维电泳，其中一块进行免疫印迹实验，将胶中HCP蛋白转移到膜上，然后进行HCP抗体孵育结合，洗涤后采用ECL或荧光等方式扫描成像；另一块采用银染的方式进行扫描成像；在专用的分析软件中对两块胶中的蛋白质点进行匹配分析，计算得到覆盖率结果。

百泰派克生物科技提供生物制药分析服务，其中包括宿主蛋白残留（HCP）分析服务。百泰派克生物科技具有经验丰富的技术人员，可以提供从实验设计、样品检测、数据分析等全套专业服务，可精准检测生物药物可能残留的宿主蛋白。