定制修饰肽合成的工作流程是什么?
定制修饰肽合成(custom modified peptide synthesis)广泛应用于信号转导研究、抗体制备、蛋白互作验证、药物靶点开发等领域。由于天然肽段往往无法满足特定实验需求,因此科研人员通常需要引入磷酸化、甲基化、乙酰化、荧光标记、生物素化等化学修饰,以实现对肽段功能和相互作用的精准调控。百泰派克生物科技提供一站式的修饰肽定制合成服务,涵盖从序列设计到纯化质控的全过程。
定制修饰肽合成工作流程
| 阶段 | 主要任务 | 核心技术 |
|---|---|---|
| 项目评估 | 序列确认,修饰选择,可行性分析 | 结构建模、修饰策略设计 |
| 合成实施 | 固相合成,修饰引入 | 自动化Fmoc SPPS |
| 纯化质控 | 纯度分离,修饰验证 | HPLC, LC-MS, MS/MS |
| 包装交付 | 冻干保存,使用指导 | 定制化交付与技术支持 |
一、项目评估与修饰策略设计
定制合成的第一步是与客户沟通明确需求,结合目标实验确定以下要素:
1、肽段序列(Amino Acid Sequence):长度通常在5–30 aa以内,过长可能影响修饰效率和纯度。
2、修饰类型与位置:如Ser/Thr/Tyr磷酸化,Lys乙酰化/甲基化,N端荧光标记,C端酰胺化等。
3、修饰的稳定性和兼容性:部分修饰对合成条件较敏感,如磷酸基团在强酸下易脱落,需采用保护策略。
4、后续应用场景:不同应用(如抗体筛选 vs 细胞内转染)对修饰位置和纯度等级要求不同。
百泰派克生物科技拥有经验丰富的技术团队,可根据客户实验目标,提供修饰类型建议与结构可行性评估,确保项目顺利启动。
二、固相合成(Solid-Phase Peptide Synthesis, SPPS)
主流的定制修饰肽合成策略为 Fmoc固相合成法,流程如下:
1、固相载体加载:将第一个氨基酸固定于树脂上。
2、逐步延伸肽链:通过DIC/HOBt等偶联试剂,将后续氨基酸逐步接入肽链。
3、引入修饰基团:
(1)对于磷酸化、甲基化等内源性修饰,使用已修饰的氨基酸单体;
(2)对于生物素、荧光团等外源标签,采用链末端或侧链修饰;
(3)特殊修饰位点采用保护基团策略,防止合成过程中修饰脱落或迁移。
4、切割与脱保护:使用TFA等试剂切割肽链并脱去保护基团,得到粗品肽段。
百泰派克生物科技采用高通量自动化肽合成平台,支持多种非天然氨基酸和修饰单体的精准引入,合成效率高,重复性好。
三、纯化与质控
粗品肽段经合成后需进行高纯度分离与定性定量检测:
1、HPLC纯化:采用反相高效液相色谱(RP-HPLC),可将主产物与杂质有效分离,纯度可达95%以上。
2、质谱检测(LC-MS):确认分子量是否符合设计,排查脱修饰或不完全偶联。
3、修饰位点特异性验证:对于多位点修饰肽,建议采用MS/MS进行二级质谱验证,确保修饰精确性。
4、其他QC项目:如氨基酸组成分析、内毒素检测(用于细胞实验)等。
四、包装交付与技术支持
1、包装形式:通常以冻干粉形式交付,便于储存和溶解。
2、储存建议:-20°C避光保存,防止修饰基团降解。
3、使用指导:根据用途提供溶解方案建议(如DMSO、水或PBS),并提醒避免反复冻融。
4、后续支持:如客户在应用中遇到信号偏弱、修饰不稳定等情况,技术团队可协助分析原因并提供优化建议。
百泰派克生物科技深知修饰肽在科研中的重要性。因此,我们不仅关注合成效率,更注重每一条肽段的功能稳定性和应用可靠性。通过与客户的深度沟通和专业定制,我们帮助全球科研人员推动信号通路解析、表观遗传调控、疫苗开发等前沿研究。如您正在寻找专业可靠的定制修饰肽合成服务,欢迎联系百泰派克生物科技。我们将以严谨的科研态度与专业的合成平台,为您的科研项目保驾护航。
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