蛋白质胶条质谱鉴定

    蛋白质胶条鉴定

    蛋白质胶条是蛋白样品经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后所得到的相互分离的蛋白条带。在电场作用下,蛋白质在聚丙烯凝胶中按照分子量大小进行迁移,形成不同的蛋白条带,每一条蛋白条带中的蛋白质可能是相同的也可能是分子量相同或相似的不同蛋白质,可能是已知的也可能是未知的,这些蛋白胶条可以切割下来,对所含的蛋白质做进一步的鉴定,即蛋白质胶条鉴定。

    蛋白质胶条质谱鉴定

    蛋白质胶条质谱鉴定是利用质谱手段对蛋白胶条进行鉴定,常用的质谱手段包括基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)和高效液相串联质谱(LC-MS/MS)。在进行质谱分析之前,需要将包埋在凝胶中的蛋白质回收提取出来,并酶解消化成肽段。

    MALDI-TOF/TOF将样品均匀包埋在固体基质晶体中,基质能吸收激光的能量并将一部分能量传递给样品分子使其离子化,在电场作用下,离子加速飞过飞行管道,离子的飞行时间与质荷比(M/Z)成正比,通过检测不同离子的飞行时间可以计算其质荷比,进行多肽和蛋白鉴定。

    LC-MS/MS将肽段通过高效液相色谱(HPLC)进行分离,分离后的肽段直接进入质谱仪进行分析,根据一级质谱获得的质荷比可以计算各肽段的分子质量;为了鉴定肽段的确切序列,进而拼接出各蛋白的完整序列,得到的肽段进行二级质谱分析,二级质谱数据结合相应数据库和检索软件可以推演多肽甚至蛋白的完整序列。

    百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合nanoLC-MS/MS纳升色谱提供,能够对SDS-PAGE蛋白条带、2D蛋白胶点等样品中的蛋白质进行高效精准鉴定,欢迎免费咨询152-0137-7680。

    相关服务:
    蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定
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