蛋白质Pull-down实验

蛋白质Pull-down

Pull-down实验又称拉下实验，是一种体外亲和纯化技术，蛋白Pull-down技术可以提供一种诱饵蛋白来特异性识别配体蛋白质，以达到富集、分离、纯化某种配体蛋白质的目的，是体外研究蛋白与蛋白相互作用的有力工具。诱饵蛋白的实质是被亲和试剂标签（如谷胱甘肽-S-转移酶、组氨酸六肽、生物素）标记的已知的蛋白。蛋白Pull-down可用于证实已知的蛋白或肽的相互作用，也可以用来发掘未知的蛋白或肽的相互作用。

蛋白质Pull-down实验原理

蛋白质Pull-down是将诱饵蛋白固定在某种固体基质（如琼脂糖）上，当目标蛋白或细胞、组织抽提液流经该基质时，可与该诱饵蛋白相互作用的配体蛋白被捕获，通过改变洗脱液或洗脱条件回收被捕获的蛋白，再利用蛋白质印迹或质谱方法检测这种互作关系。

蛋白质Pull-down技术是一种体外亲和纯化技术，在一定程度上不能真实的反应细胞内蛋白质之间的相互作用，因为在体外相互作用的蛋白质在正常生理条件下不一定会相互结合。

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