分子筛怎么看蛋白大小
分子筛即凝胶渗透色谱,又称凝胶过滤色谱、空间排阻色谱,是根据蛋白质的分子质量或尺寸大小差异来分离蛋白质以实现蛋白质纯度、分子质量等鉴定的分析方法。待分析的蛋白质样品进入用带孔凝胶颗粒填充的色谱柱时,分子尺寸大于孔直径的蛋白质不能进入凝胶颗粒而只能在凝胶颗粒的间隙中流动,洗脱的路径和时间较短,因此最早被洗脱出来;而分子尺寸小于孔直径的蛋白质分子能进入凝胶颗粒内部因而洗脱路径和时间较长,较晚流出色谱柱。因此,根据蛋白质在分子筛中的洗脱时间可以判定其分子量和尺寸大小,最先洗脱出来的蛋白组分分子量和体积最大,最晚洗脱出来的蛋白质组分分子量和尺寸最小。用已知相对分子质量的蛋白质作为标准品在一定型号的葡聚糖凝胶柱上层析并测定其洗脱体积,然后以洗脱体积(Ve)对分子量的对数(logMW)作图,即可得到Ve与logMW的关系图,将未知大小的蛋白质在该葡聚糖凝胶填充条件下层析,可根据其Ve在标准曲线上求得该蛋白对应的分子量。
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