HPLC多肽分子量测定
分子量是化合物的基本理化参数,指组成化合物的各原子的相对原子质量之和,也是蛋白质/多肽的重要特征参数之一,在蛋白质/多肽的鉴定中扮演着十分重要的角色,分子质量的正确与否也是判断其结构正确与否的一个重要指标。常用的蛋白质/多肽的分子量鉴定方法包括SDS-凝胶电法、粘度法、凝胶渗透色谱法、凝胶过滤层析法以及质谱法等。
凝胶渗透色谱法(Gel Permeation Chromatography,GPC)和凝胶过滤层析法(Size Exclusion Chromatography,SEC)都属于高效液相色谱(HPLC)技术,二者鉴定分子量的原理相似,都是基于蛋白质/多肽分子的大小将混合物中的各组分分离开来,利用多孔的凝胶分子筛填充色谱柱,当混合样品流经色谱柱时,分子量较大的组分不能渗入凝胶孔,只能从凝胶间隙中通过,因此最先洗脱出来,而分子量较小的组分则可以进入凝胶孔内,因此洗脱的时间更长,而较晚洗脱出来,通过测定各组分的洗脱时间及洗脱液的体积,并与标准样品比较,即可计算各组分的相对分子质量,并估算其分子量分布。
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