百泰派克生物科技BTP客户案例：利用Co-IP结合质谱技术研究DEV GC与宿主蛋白的相互作用网络

期刊：Journal of Proteomics；影响因子：4.0638

原文链接：DOI: 10.1016/j.jprot.2021.104281

研究对象：鸭肠炎病毒（DEV）

研究目的：探索DEV病毒的感染和致病机制

研究手段：互作蛋白质组学等

研究内容及结论：鸭肠炎病毒（DEV）是鸭病毒性肠炎的病原，可在禽形目（水禽）中引起一种传染性、致死性的病毒性疾病。在病毒感染中，宿主-病毒相互作用在病毒复制和发病机制中起着至关重要的作用。在作者之前的研究中，将MRFP与DEV糖蛋白C（GC）的C末端融合，构建了荧光标记的DEV病毒rgCRFP。本研究采用荧光融合蛋白（gC-mRFP）作为蛋白质组学探针。使用商业抗RFP抗体对rgCRFP感染的鸡胚胎成纤维细胞的蛋白进行免疫共沉淀和质谱分析，共鉴定出21个与gC相互作用的宿主蛋白。在这21种蛋白质中，通过膜结合裂解泛素酵母双杂交系统（MbYTH）和双分子荧光互补（BIFC）分析证实了7种宿主蛋白（GNG2、AR1H1、PPP2CA、UBE2I、MCM5、NUBP1、HN1）与DEV GC蛋白的相互作用。本研究进一步加深了对DEV病毒感染和致病机制的认识。

利用Co-IP结合质谱技术研究DEV GC与宿主蛋白的相互作用网络，该服务由北京百泰派克生物科技提供。用RFP标签从rgCRFP感染的CEF裂解物中免疫沉淀GC相关宿主蛋白进行亲和纯化。随后，对共纯化的宿主因子进行LC-MS/MS分析，结果鉴定出14284个多肽和2800个蛋白质。经过三次重复分析，共有21种细胞蛋白被确认为GC相互作用蛋白。

参考文献：Chen L, Ni Z, Hua J, et al. Proteomic analysis of host cellular proteins co-immunoprecipitated with duck enteritis virus gC[J]. Journal of Proteomics, 2021, 245: 104281.

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