百泰派克生物科技BTP客户案例：利用蛋白质组学手段表征单结构域抗体B7

期刊：Journal of Food Processing and Preservation；影响因子：2.6098

研究对象：肌原纤维结合丝氨酸蛋白酶（MBSP）特异性单结构域抗体

研究目的：表征鲨鱼衍生的MBSP特异性单结构域抗体B7

研究手段：蛋白质组学等

研究内容及结论：鱼肉中存在的肌原纤维结合丝氨酸蛋白酶（MBSP）是导致凝胶变质的主要原因，严重影响鱼糜制品的品质。筛选和制备高效、特异的蛋白水解酶抑制剂是解决鱼脯品质下降的重要途径。本研究表达了鲨鱼衍生的MBSP特异性单结构域抗体，并对其特性进行了系统的研究。结果表明，利用SUMO融合标签的大肠杆菌表达系统，可以可溶性表达针对MBSP的单域抗体，且具有良好的热稳定性和pH稳定性。当单域抗体浓度为0.1 mg/ml时，体外酶活抑制率可达62.9%。将其添加到鲤鱼鱼脯中，可显著抑制鱼脯凝胶变质。本研究结果表明，鲨鱼来源的单域抗体可以作为MBSP的一种新的抑制剂，用于控制鱼脯制品中的凝胶降解。

Sequence	Length	Mass	Start position	End position	PEP	Score	Intensity
SIIRNSMAR	9	1046.5655	2	10	0.016868	18.035	11,890,000
VDQTPQTITK	10	1129.5979	11	20	1.03E-199	144.77	1.9888E+10
VDQTPQTITKETGESLTINCVLR	23	2602.3272	11	33	0	237.89	1,004,500,000
VDQTPQTITKETGESLTINCVLRDSNCALSSTYWYR	36	4205.9998	11	46	0.0007607	37.857	13,830,000
ETGESLTINCVLR	13	1490.7399	21	33	1.63E-153	115.78	1,912,300,000
DSNCALSSTYWYR	13	1621.6831	34	46	0	168.22	395,000,000
DSNCALSSTYWYRK	14	1749.7781	34	47	2.20E-301	155.97	1,595,700,000
SGSTNEESISK	11	1137.515	49	59	7.78E-154	113.62	0
GGRYVETVNSGSK	13	1352.6684	60	72	0	167.71	26,138,000
YVETVNSGSK	10	1082.5244	63	72	1.27E-153	113.71	9,429,100
YVETVNSGSKSFSLR	15	1672.842	63	77	0	262.93	486,240,000
YVETVNSGSKSFSLRINDLTVEDSGTYR	28	3136.5313	63	90	0	153.17	217,710,000
SFSLRINDLTVEDSGTYR	18	2072.0174	78	90	2.06E-153	116.51	186,770,000
INDLTVEDSGTYR	13	1481.6998	78	90	0	163.34	1,752,700,000
INDLTVEDSGTYRCK	15	1769.8254	78	92	0	174.24	95,252,000
DSWAWCR	7	979.39704	102	108	1.37E-81	117.7	6,089,600,000
TGEDVYGDGTAVTVNAAASLI	21	2022.9746	109	129	1.63E-134	174.42	3,894,000,000

利用蛋白质组学手段表征单结构域抗体B7，该服务由北京百泰派克生物科技提供。MALDI-TOF-MS分析显示，纯化后的B7分子量为14.057 kDa，与B7的理论结果（14.1 kDa）一致。Edman降解法分析B7的N端序列，结果显示，与19种PTH氨基酸的标准图谱相比，B7的N端前6个氨基酸分别为NH2-Ser/Ala-Ile-Ile-Arg-Asn-Ser，这与理论序列一致的。用LC-MS/MS对B7的完整氨基酸进行分析，结果显示除了从93位到101位缺失的肽段外，所有的氨基酸都覆盖了理论序列中的氨基酸，这就足以证实B7的表达是成功的，且SUMO融合表达系统具有高效、活性高的优点，可用于可溶性鲨鱼单结构域抗体的表达。

参考文献：Qu Y, Han X, Liu X, et al. Preparation, characterization, and potential application of shark derived single domain antibody against myofibrillar binding serine protease in Silver carp[J]. Journal of Food Processing and Preservation, 2022, 46(10): e16912.

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