蛋白质N端测序技术

    蛋白质表达起始于N端,蛋白质N端序列对于蛋白的功能、蛋白稳定性、以及在细胞中的定位都有着重要作用,因此蛋白质N端序列分析能为蛋白质功能、定位等研究提供重要依据。

    测序原理
    I、Edman降解测序法

    蛋白质表达起始于N端,蛋白质N端序列对于蛋白的功能、蛋白稳定性、以及在细胞中的定位都有着重要作用,因此蛋白质N端序列分析能为蛋白质功能、定位等研究提供重要依据。

    蛋白质Edman测序流程

    Edman测序循环包括3步:

    1. 在碱性条件下,PITC与蛋白N端的游离氨基结合
    2. 在酸性溶液中,N端残基被切除
    3. PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH残基,经过在线的HPLC分析,根据洗脱时间不同,从而确定氨基酸种类。

    II、质谱测序法

    蛋白质质谱测序流程

    质谱测序原理是将蛋白质经胰蛋白酶酶切后,直接用串联质谱测定酶切肽段混合物,然后通过一级质谱选择N端肽段离子进行串联质谱分析而得到N端序列。能够对混合蛋白、末端封闭或糖基化的蛋白质进行测序。

    测序平台
    SHIMADZU PPSQ-33A测序仪

    SHIMADZU PPSQ-33A测序仪

    平台优势
    • 高灵敏度检测PTH-氨基酸
    • UV-VIS探测器SPD-20A
    • 稳定分析微量样品
    • 准确区分分子量相近的氨基酸(I/L、Q/K)


    Obitrap Fusion Lumos质谱仪

    Obitrap Fusion Lumos质谱仪



    平台优势

    • 分辨率高达 500,000 FWHM
    • 高容量离子传输管
    • 超低检测限的电动离子漏斗
    • 高清ETD,显著增加碎片离子覆盖率

    测序亮点
    • 可测定多种形式的样品:蛋白溶液、PVDF蛋白条带
    • 仅需1-10 ug蛋白样品即可完成检测
    • 可测定蛋白N端多达70个氨基酸序列
    • 全自动序列分析,序列分析更准确
    • 测序不受N端封闭,PEG和糖基化等N端修饰的影响

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