基于IEF的蛋白等电点分析

蛋白质分子是两性电解质，当调节溶液的酸碱度，使蛋白质分子上所带的正负电荷相等时，在电场中，该蛋白质分子既不向正极移动，也不向负极移动，这时溶液的pH值，就是该蛋白质的等电点（isoelectric point, pI）。蛋白的等电点与其氨基酸序列和三维结构密切相关，特定蛋白的等电点是固定的，因此可以通过比较不同蛋白质的等电点来研究它们的结构和功能差异，精确测定等电点是生物制品电荷异质性表征的重要一环。

等电聚焦（Isoelectric Focusing，IEF）是一种非常有效的蛋白质等电点分析技术。其利用等电点处的蛋白质电荷为零的特性，带电的蛋白质在电泳中向极性相反的方向迁移，当到达其等电点（此处的pH值使相应的蛋白质不再带电荷）时，电流达到最小，不再移动，从而达到检测生物制品等电点的目的。百泰派克生物科技（BTP）通过CNAS/ISO9001双重质量认证体系；公司根据IEF原理，建立了针对于不同类别生物制品的蛋白等电点检测平台，可实现对蛋白、抗体、疫苗、多肽、胶原蛋白等的等电点精确测定。

实验仪器

GE公司的Ettan IPGphor 3

技术应用

基于cIEF的等电点分析，检测器采集280nm处的吸收峰。对于280nm处无吸收峰的生物制品，例如胶原蛋白，cIEF的方法显然不太合适。基于IEF的方法是对280nm处无吸收峰蛋白等电点检测的有效补充，并在胶原蛋白类生物制品和医疗器械表征中得到广泛应用。

案例示意

实验过程中，一根胶条用来测试Marker，对预制胶条的pI分布情况进行校准，另外一根胶条用来测试样品；两个胶条同时进行等电聚焦以减少系统误差。

左边为pI marker结果，右边为胶原蛋白样品结果

典型问答

问题1：为什么多数蛋白质的等电点是中性偏酸性？

回答：蛋白质是由氨基酸组成的，而大多数氨基酸等电点小于人体的pH（pH=7.4），故而大多数的蛋白质的等电点偏酸性，如山羊胃蛋白酶等电点约为3。

问题2：有没有等电点偏碱性的蛋白质？

回答：存在pI碱性的蛋白质。当蛋白质中的碱性氨基酸，如组氨酸，精氨酸、赖氨酸、比列较大，会导致等电点偏碱性，如鱼精蛋白等电点约为12。

问题3：做等电点检测，两种检测方法如何选择？

回答：基于CIEF的等电点检测需要样品具有280nm的紫外吸收；不具有280nm的紫外吸收的样品（例如胶原蛋白）进行基于IEF的等电点检测。

中/英文项目报告

在技术报告中，百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告，报告包括：

1. 实验步骤（中英文）
2. 相关的实验参数（中英文）
3. 基于IEF的蛋白等电点分析详细信息
4. 电泳图片
5. 原始数据