靶点验证新趋势：竞争性ABPP解析
在新药研发中，“靶点筛选”并不意味着“靶点确认”。即使一个候选蛋白在差异表达或通路富集分析中被反复识别，也不代表它确实是药物直接作用的靶点。真正关键的问题是：
这个蛋白是否是药物作用的“直接靶点”？是否存在共价结合？是否有选择性抑制？是否存在潜在脱靶？
蛋白质组学和分子生物学方法很难直接回答这些问题。而竞争性ABPP（Competitive Activity-Based Protein Profiling），作为ABPP技术的延伸与强化版本，正在成为靶点验证领域的新趋势与新标准。百泰派克生物科技在ABPP平台基础上，率先建立竞争性ABPP分析流程，已广泛应用于新型共价抑制剂、天然产物活性验证、以及先导化合物脱靶风险评估项目中。
一、什么是竞争性ABPP？
标准ABPP（Activity-Based Protein Profiling）通过共价探针（ABP）标记活性蛋白，结合质谱技术识别并定量这些活跃酶类，常用于筛选功能蛋白、识别药物靶点。
竞争性ABPP是一种通过引入药物竞争机制、增强靶点验证能力的功能蛋白组学方法。其基本原理是：利用小分子药物与活性位点探针对同一酶活性中心的“竞争”结合，推断药物是否直接作用于该靶点酶。竞争性ABPP以经典ABPP技术为基础，但在实验设计上引入了关键的“先药物、后探针”的竞争步骤，其基本流程如下：
1、样本分组处理，包括药物处理组与对照组；
2、分别加入ABP探针，进行标准的活性位点标记；
3、富集并酶解蛋白质样本，保留与探针结合的活性酶；
4、通过质谱分析对比两组中各酶的探针结合程度；
5、根据探针信号变化判断药物是否与该酶直接竞争结合。
若某一酶在药物组中信号显著降低，则表明药物对该酶的活性中心具有较强亲和力，提示为候选直接靶点。反之，信号不变则说明该酶未被药物作用或为非靶向结合。
二、竞争性ABPP的独特优势
与蛋白组学、化学蛋白质组学方法相比，竞争性ABPP展现出多维度的优势：
1、功能导向
竞争性ABPP关注的是蛋白的活性状态而非总量或表达水平，能够捕捉到在疾病或药物刺激下真实参与生理过程的“功能性靶点”。
2、结合事件直接可视化
通过对比药物干预前后的探针结合差异，研究者可直接判断药物是否作用于特定酶的催化中心，从而避开传统验证路径中繁琐的“间接信号解释”。
3、选择性与脱靶评估同步完成
竞争性ABPP不仅可以确认药物是否作用于目标酶，还可以在同一实验体系中评估其对非目标酶类的作用影响，对优化药物结构、降低毒副风险具有重要参考价值。
4、技术适配性强
该技术兼容细胞裂解液、组织匀浆甚至体内标记体系，适合在多个模型系统中开展验证实验，具备良好的转化能力。
三、为什么竞争性ABPP成为“靶点验证新标准”？
1、明确识别“直接结合靶点”
相比差异蛋白筛选方法，竞争性ABPP可直接判断药物是否与特定酶发生物理结合，是目前最可靠的“共价靶点确认手段”。
2、分析药物选择性
通过“竞争阻断程度”评估药物对不同酶的亲和力与选择性，利于优化结构、控制副作用。
3、检测脱靶效应
竞争性ABPP可发现药物意外作用的非靶向酶，提示潜在毒性或干扰机制。
4、适配共价药物开发路径
在Ibrutinib、Neratinib、Afatinib等多个共价药物开发案例中，竞争性ABPP已被广泛用于申报前靶点验证数据准备。
百泰派克竞争性ABPP平台的专业支持
作为功能蛋白组学方向的核心平台，百泰派克在竞争性ABPP技术领域建立了从探针筛选、样本处理、质谱检测到靶点数据解读的全流程标准服务体系：
1、支持多种酶类探针，涵盖丝氨酸酶、半胱天冬酶、金属蛋白酶等；
2、样本适配范围广泛，支持细胞系、动物组织、人类生物样本等；
3、定量精度可控，基于高分辨质谱平台进行肽段识别与定量；
4、提供结合抑制分析报告，包含阻断率计算、靶点优先级排序、GO/KEGG注释与图谱化输出；
5、提供多轮验证设计支持，适配结构改进、剂量梯度、时间动态分析等实验需求。
传统靶点研究往往依赖多轮表达验证与功能推测，难以快速明确药物与酶类靶点的直接关系。而竞争性ABPP提供了一种更清晰、更逻辑严谨的验证路径：用“阻断”证明“结合”，用“差异”确认“直接作用”。在“表达→功能→作用机制”这一科研认知链条中，竞争性ABPP正逐步成为承上启下的关键技术环节。
百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商
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