蛋白质串联质谱鉴定

蛋白质的鉴定方法

蛋白质鉴定是指用一定生化和物理方法对蛋白质进行准确的筛选和鉴定。传统的蛋白质鉴定方法,如免疫印迹、已知或未知蛋白质的迁移分析以及多肽的化学测序,这些鉴定方法相对复杂、费时且准确性较低。

蛋白质鉴定方法经历了图像分析技术、微测序、氨基酸组成分析到质谱分析的过程。图像分析技术利用到光谱仪,整个过程涉及胶点检测、背景去除,胶点匹配和数据库构建。图像分析和氨基酸组成分析需要与其他蛋白质鉴定技术相结合以完成整个过程。微测序技术发展日新月异,已经达到了蛋白质自动识别的能力。目前,研究人员越来越倾向于选择质谱相关技术来快速鉴定蛋白质。

蛋白质质谱鉴定的不同方法

质谱法可以将肽指纹图谱和肽片段的测序结果与蛋白质数据库中蛋白质的理论肽质谱图指纹图(PMF)进行比较,以寻找最佳的候选蛋白质。与质谱法相关的蛋白质鉴定方法包括基于MALDI-TOF的蛋白质鉴定和基于质谱的蛋白质鉴定

MALDI-TOF/MS

MALDI-TOF/MS的原理

MALDI-TOF是一种基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪。基于MALDI-TOF的蛋白质指纹图谱分析方法是用特定的蛋白水解酶(通常是胰蛋白酶)消化样品,获得质谱,生成所有多肽(或MH +)的质量。利用这些质量特征作为指纹,在数据库中搜索蛋白质并与测量质量相匹配。与最高分相匹配的蛋白质是候选蛋白质。

MALDI-TOF质谱分析的过程

MALDI-TOF质谱分析的过程

MALDI-TOF/MS的优势

MALDI-TOF/MS的优势在于高精度离子反射器和延迟的离子提取,依赖于这项优势,MALDI-TOF/MS可以快速收集数据并对结果进行分析。

MALDI-TOF/MS的应用

MALDI-TOF/MS主要用于临床医学、食品工业和动植物检疫中微生物的鉴定和分类。

LC-MS/MS

LC-MS/MS的原理

液相色谱-质谱系统可以通过分析物质的分子量和元素组成来研究分子结构等信息。在使用LC-MS/MS进行测序鉴定蛋白质时,通过高效液相色谱法分离蛋白水解消化(通常为胰蛋白酶消化)中的多肽混合物。用Tandam质谱和HPLC对肽段进行碎裂,对每个片段的肽段进行质谱分析。每个样品通常有数千个MS/MS谱图,每个对应于特定的肽序列MS/MS谱图用于在蛋白质数据库中搜索匹配的肽以最终鉴定蛋白质。此外,将反相液相色谱和串联质谱相结合,可以检测到皮摩尔级别的蛋白质。目前蛋白质鉴定多采用酶解、液相色谱分离、串联质谱和计算机算法相结合的方法。

液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)

液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)

LC-MS/MS的优势

LC-MS/MS可以分析小或中极性分子,具有较高的灵敏度和特异性。

LC-MS/MS的应用

LC-MS/MS可以测定蛋白质分子量,分析多肽和蛋白质修饰位点,鉴定蛋白质。在生物化学、农业和临床医学等领域均有应用。

相关服务

分子量测定
蛋白质谱鉴定
蛋白测序

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