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多肽氨基酸比值测定是一种用于分析多肽或蛋白质中各种氨基酸含量的比例的实验方法。
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多肽分子量的测试通常通过质谱(Mass Spectrometry, MS)技术进行。质谱是分析化学中一种用于测量样品中化学物质质量到电荷比(m/z)的技术。对于多肽分子量的测定,质谱可以提供高精度和高灵敏度的结果。
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外周血是可以用于多肽组学分析的样本类型之一。多肽组学(Peptidomics)是研究生物样本中所有多肽分子的科学,旨在鉴定和定量这些分子,以了解它们在生理和病理过程中的作用。
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内源性免疫沉淀(endogenous IP)后的蛋白进行质谱分析是一种常用于鉴定特定蛋白质在生理条件下的相互作用伙伴及其潜在功能的技术。与外源性表达的标签蛋白相比,内源性IP更接近于生物体的自然状态,因此能够提供更为准确和生理相关的信息。下面是将内源性IP与质谱分析结合使用的一般步骤和要点。
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要制定一个IP质谱(免疫沉淀质谱分析)的实验方案,通常包括以下几个主要步骤:
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鉴别小分子量多肽通常涉及一系列技术和方法,旨在精确确定多肽的序列、结构和可能的功能。以下是实现这一目标的几种关键技术:
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MS/MS 和 MS2 质谱通常是指串联质谱(Tandem Mass Spectrometry)的简称。在这种技术中,分子首先在一级质谱(MS)中被分离,然后选定的离子在第二级质谱(MS2 或 MS/MS)中被进一步碎裂成更小的片段。通过分析这些片段的质量,可以获得关于原始分子结构的详细信息
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O-糖基化是一种常见的蛋白质和肽的翻译后修饰,涉及一个糖基(通常是N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖)通过O-糖苷键直接连接到蛋白质或肽的丝氨酸(Ser)或苏氨酸(Thr)残基上。O-糖基化对于蛋白质的功能、稳定性和细胞间通信至关重要,其异常与多种疾病(如癌症、心血管疾病和神经退行性疾病)相关。
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蛋白质pull-down实验是一种用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的实验技术。它允许研究者鉴定一个特定蛋白质(称为“靶蛋白”)与其他蛋白质之间的物理相互作用。通过这种方法,可以深入了解蛋白质在细胞内的功能以及它们是如何在不同的生物学过程中相互作用的。
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共免疫沉淀(Co-IP)和质谱分析是两种强大的生物化学和分子生物学技术,常被联合使用来研究蛋白质-蛋白质相互作用及蛋白质复合体的组成。通过这种结合,研究人员能够鉴定特定蛋白质在生物体中的直接或间接相互作用伙伴,深入探究蛋白质的功能和调控机制。
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