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多肽从头测序

多肽的序列分析常见的有两种方法:数据库搜索和de novo从头测序法。数据库搜索需要在已知/给定的数据库中进行搜库,从而对多肽序列进行识别。但是由于有些物种的数据库不足,很多新的或是活性肽无法在数据中匹配到。多肽从头测序可以解决这个难题。多肽从头测序是指在没有序列数据库的帮助下,利用串联质谱(MS/MS)获取肽的氨基酸序列的分析过程。优势在于,无论有没有理论数据库,抑或是新的,未知的多肽均可对其进行序列分析。

从头测序的基本原理是利用两个片段离子之间的质量差来计算肽链上氨基酸残基的质量。多肽从头测序技术的实现与质谱技术的发展紧密相关。近年来质谱的质量分辨率提高了好几个数量级,尤其是高精确质谱性能的显著提高为多肽序列分析提供了有力的基础。

多肽从头测序 高质量光谱理论碎片离子示意图
多肽从头测序 高质量光谱理论碎片离子示意图

百泰派克生物科技使用 nanoLC-MS/MS纳升色谱结合串联质谱,提供基于质谱的多肽de novo从头测序服务,对多肽序列进行分析。百泰派克使用Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪实现对肽段样品的序列分析,Obitrap Fusion Lumos质谱仪是现在分辨率和灵敏度最高的质谱仪,保证了低丰度肽段碎裂片段鉴定的灵敏度;同时在肽段碎裂过程中采取HCD与ETD结合的模式,保证肽段碎裂片段的完整性。得到质谱原始数据之后,采用从头测序的方式对多肽序列进行推导。

样品制备的建议:
尽可能准备20 ug以上的样品,溶液和冻干粉均可。如果是溶液样品,buffer中不含有高盐、SDS等去垢剂。
**可咨询百泰派克生物科技的技术人员,有针对性的进行样品制备。

百泰派克生物科技可对来自液体及固体状态下的样品进行多肽序列分析。固体样品,使用冰袋运输即可;溶液样品,可进行真空抽干或冷冻抽干后,使用冰袋运输,也可通过干冰对样品进行运输。欢迎来电咨询。

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