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基于质谱的序列分析

基于质谱的蛋白质,抗体,多肽等样品的序列分析,是对样品氨基酸序列的分析。质谱测序即指基于质谱对样品一级结构氨基酸序列的测定。在进入质谱序列分析之前,我们先对几个定义进行简单的介绍。氨基酸是含有胺(-NH2)和羧基(-COOH)官能团以及每个氨基酸特有的侧链(R基团)的有机化合物。肽是由肽键连接的两个至五十个氨基酸组成的短链。多肽是更长,连续,不分支的肽链,最多可包含约五十个氨基酸的较长的肽链。包含五十个以上氨基酸的多肽/肽链被称为蛋白质。蛋白质由一种或多种以生物学功能基团方式排列的多肽组成,通常可结合至配体(例如辅酶和辅因子),另一种蛋白质,其他大分子(例如DNA或RNA)或更复杂的大分子装配体。抗体(Ab),也称为免疫球蛋白(Ig)则是主要由浆细胞产生的大的Y形蛋白质,被免疫系统用来中和病原体,例如病原细菌和病毒。

相关服务:

基于质谱的蛋白测序
基于质谱的单克隆抗体测序
基于质谱的多肽序列分析

较Edman降解法而言,质谱法测序的优点在于,质谱法更敏感,可以更快地裂解肽,可以识别末端封闭或修饰的蛋白样品。百泰派克生物科技利用现有的高分辨率质谱技术平台,提供以质谱为基础的序列分析服务,可实现对所测定靶蛋白序列100%的覆盖。

质谱测序示意图
质谱测序示意图

蛋白样品序列分析过程一般只会使用Trypsin对蛋白进行酶切,鉴定到的肽段覆盖率大概在60%。为了得到靶蛋白的全部序列信息,百泰派克生物科技会选用在蛋白序列分析过程中常用的6种蛋白酶(Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N)分别对靶蛋白进行酶切和质谱测定,在得到碎裂肽段片段的同时,经过肽段之间的拼接完成蛋白序列100%的测定。百泰派克使用Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪实现对蛋白样品的序列分析,Obitrap Fusion Lumos质谱仪是现在分辨率和灵敏度最高的质谱仪,保证了低丰度肽段碎裂片段鉴定的灵敏度;同时在肽段碎裂过程中采取HCD与ETD结合的模式,保证肽段碎裂片段的完整性。可以实现蛋白样品的N端,C端序列分析,蛋白全长序列分析。对未知理论序列的样品,可通过从头测序法进行序列分析。

百泰派克提供以下基于质谱的序列分析服务:

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