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百泰派克
• 蛋白质质谱鉴定 • 定量蛋白组分析 • 翻译后修饰蛋白组分析 • 序列分析 • 糖蛋白分析 • 蛋白质组学生物信息学分析 • 多肽组学分析 • 亚细胞蛋白质组学 • 外泌体蛋白质组学 • 细胞表面蛋白质组学

蛋白测序

蛋白质一级结构是组成蛋白质多肽链的线性氨基酸序列。蛋白测序,蛋白序列分析,蛋白一级结构分析,蛋白氨基酸序列分析是确定蛋白质全部氨基酸序列的过程。通过蛋白质测序获得的信息,有非常多有价值的用途,包括:1,用于蛋白质的鉴定;2,设计分子克隆的探针;3,合成可用作免疫原的肽段等。

蛋白测序服务常见有两种主要的方法:Edman降解(Harvey和Ferrier,2011; Bauer等,1997)和质谱分析(MS)(Sahukar等,2016)。目前使用最广的蛋白质测序和鉴定方法是质谱法,而Edman降解则是表征蛋白质N端最重要的方法之一。百泰派克生物科技使用nano LC-MS/MS纳升色谱结合串联质谱岛津公司Edman降解测序系统对蛋白质序列进行分析,提供基于质谱的蛋白测序分析服务,包括对蛋白质的氨基酸组成分析N端测序C端测序全序列分析,以及基于Edman降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质,提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务,对蛋白序列进行分析。

相关服务:

蛋白质N/C端测序
基于Edman降解的蛋白质N端测序
蛋白质全长序列分析
蛋白从头测序

基于质谱的蛋白质序列分析

质谱法用于蛋白质序列分析,较Edman降解法而言,其优点在于,质谱法更敏感,可以更快地裂解肽,可以识别末端封闭或修饰的蛋白质。百泰派克生物科技利用现有的高分辨率质谱技术平台,提供以质谱为基础的蛋白质序列分析服务,可实现对所测定靶蛋白序列100%的覆盖。此分析可以用于确认重组蛋白是否得到完整表达,检测重组蛋白表达过程是否发生断裂等。

蛋白样品序列分析过程一般只会使用Trypsin对蛋白进行酶切,鉴定到的肽段覆盖率大概在60%。为了得到靶蛋白的全部序列信息,百泰派克生物科技会选用在蛋白序列分析过程中常用的6种蛋白酶(Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N)分别对靶蛋白进行酶切和质谱测定,在得到碎裂肽段片段的同时,经过肽段之间的拼接完成蛋白序列100%的测定。百泰派克使用Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪实现对蛋白样品的序列分析,Obitrap Fusion Lumos质谱仪是现在分辨率和灵敏度最高的质谱仪,保证了低丰度肽段碎裂片段鉴定的灵敏度;同时在肽段碎裂过程中采取HCD与ETD结合的模式,保证肽段碎裂片段的完整性。可以实现蛋白样品的N端,C端序列分析以及蛋白全长序列分析。

蛋白质测序示意图
蛋白质测序示意图

Edman降解法蛋白质N端序列分析

Edman降解测序法是能够获得蛋白质N端氨基酸序列信息的化学方法,由Pehr Edman在1950年代初期开发的。该方法可在不干扰肽键的情况下标记并对N末端的氨基酸序列进行分析(Hunkapiller,1988; Liu等人,2016)。

Edman降解法在蛋白质样品N端序列分析中得到了广泛应用。但是在实际应用中,Edman降解法也有一定的局限。例如N末端封闭或有化学修饰的情况下将不能使用Edman降解法对蛋白质序列进行分析。这时就可以借助先进的nano LC-MS/MS纳升色谱结合串联质谱平台对N端序列进行质谱测序,质谱平台可以实现末端封闭和修饰的蛋白质的序列分析,与Edman降解法形成互补,保证N端测序服务的顺利进行。百泰派克生物科技采用岛津公司 edman测序系统,为广大科研工作者和科研客户提供纯化后蛋白产物、蛋白疫苗以及各类蛋白样品的N端测序服务。采用我们的测序系统,可以测定N端多达30个氨基酸的序列信息。

样品制备

有许多可以进行样品制备的方法,没有特定的方法是效果最好的样品制备方式。每个样品方式都有各自的优点和缺点。制备特定样品的最佳方法可结合实验室的经验及常用方法,并参考您自己关于产率,纯度,成本和速度的要求。最常用于制备蛋白质测序样品的方法包括:
1. 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
2. 高效液相色谱(HPLC)
3. 毛细管电泳(CE)

*选择样品制备方法时需要考虑的因素包括:1)实验周期要求,2)样品的纯度要求,3)所需蛋白的质量。如果您暂时不具备样品制备的条件,百泰派克生物科技一站式蛋白分析服务提供样品制备服务,欢迎来电咨询。

关于样品

百泰派克生物科技一站式蛋白测序服务可对来自PVDF膜,胶点,胶条,溶液等状态下的样品进行蛋白质序列分析。样品运输是大家比较常见的问题,切下的蛋白条带进行密闭包装,使用冰袋运输即可;溶液样品,可进行真空抽干或冷冻抽干后,使用冰袋运输,也可通过干冰对样品进行运输。欢迎来电咨询。

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