泛素化修饰肽段富集试剂盒

使用方法

本试剂盒采用抗K-ε-GG（Lys-Gly-Gly）特异性抗体的捕获原理，整个实验流程简便，适用于不同的实验室环境和实验规模，以下为推荐使用的标准化步骤。

肽段水平泛素化富集流程：

1、样品准备

（1）将酶切后的蛋白样本进行C18柱或等效方式脱盐，并冷冻干燥。

（2）建议起始量为>500 µg蛋白酶解产物，重悬于Wash buffer 2中，确保肽段完全溶解。

2、beads与抗体结合

（1）先用Wash buffer 1清洗beads材料，重复两次；

（2）用200µL Wash buffer 1重悬beads，将适量的抗体加入，4℃旋转孵育2h；

（3）离心分离beads，保留上清。

注：建议使用BCA方法对孵育后上清进行定量，确保抗体全部结合

3、肽段孵育

将重悬后肽段加入beads沉淀中，4℃旋转孵育过夜

4、洗涤杂质

（1）离心分离beads；

注：用户可根据自身需求决定是否保留去除泛素化修饰的肽段溶液

（2）将beads用Wash buffer 2洗涤两次，保留beads；

（3）再用Wash buffer 3洗涤两次，保留beads；

5、洗脱泛素化肽段

（1）更换新的收集管，加入100 µL Elution Buffer，室温孵育10分钟，离心收集，再加入100 µL Elution Buffer 2，重复一次，共200 µL。

（2）将富集后的泛素化肽段样本进行C18柱或等效方式脱盐，并冷冻干燥。

6、下游分析

使用20 µL 0.1%甲酸重悬干燥产物，直接用于LC-MS/MS分析或肽段浓度测定。

注意事项

（1）处理过程应在低温下进行（如置于冰上操作），以保持泛素化修饰的稳定性。

（2）所有缓冲液应提前冷却。

产品优势

✅ 高选择性与特异性

使用高亲和力抗体能够高选择性识别泛素化修饰位点，实现泛素化蛋白或肽段的精准富集，有效去除非特异性背景信号，确保后续分析结果的准确性和重现性。

✅ 多种富集策略可选

提供肽段级别的富集方案，适配不同研究目的，如泛素化调控机制研究、泛素化位点分析等，灵活适配不同实验需求与研究深度。

✅ 操作简便

完整提供样品制备、结合、洗涤、洗脱等关键试剂和说明，2天内完成整个富集流程，无需额外添加试剂或复杂设备，适合常规实验室和自动化平台使用。

✅ 样品适应性广

兼容多种样本来源，包括贴壁/悬浮细胞、组织、重组表达产物、体液样品等，适用于哺乳动物、小鼠、大鼠等多种物种背景。

✅ 适配多平台后续分析

富集产物可用于质谱分析、Western blot、ELISA、免疫共沉淀等多种下游实验，兼容性强，实验拓展性高。

应用

1、泛素化修饰位点分析

通过肽段水平的富集策略，结合 LC-MS/MS 质谱平台，可实现对 K-ε-GG 修饰肽段的高通量鉴定与定量，揭示泛素化的位点分布、修饰模式及动态变化，适用于构建泛素修饰组图谱。

2、信号通路与降解机制研究

通过富集泛素化信号分子，研究泛素化调控在经典信号通路中的功能地位。

3、药物筛选与功能验证

配合化合物干预实验，监测蛋白泛素化水平变化，评估药物对蛋白降解或泛素化调控的影响。

4、疾病机制研究

研究神经退行性疾病、肿瘤、免疫紊乱等疾病中泛素化通路的异常表达，为靶向治疗策略提供依据。