糖基化是最常见、最复杂的蛋白质翻译后修饰之一,在细胞识别、信号转导、免疫调节和疾病发生中发挥关键作用。糖蛋白经过蛋白酶解后产生的糖肽,是糖基化修饰研究的重要目标。然而,由于糖肽通常在复杂生物样本中的含量极低,且常常被非糖肽掩盖,直接进行质谱检测往往难以获得可靠结果。
为了提升糖肽在质谱分析中的信号强度与检出率,实验前通常需要进行糖肽的选择性富集。糖肽富集技术能够有效从复杂的蛋白水解产物中分离糖肽,提高分析的灵敏度和特异性。百泰派克生物科技开发的糖基化修饰肽段富集试剂盒,正是为此需求而设计,帮助研究人员高效获取目标糖肽,用于后续的定性和定量分析。
产品详情
百泰派克生物科技的糖基化修饰肽段富集试剂盒基于固相亲和层析原理,利用对糖基化结构具有高度亲和力的功能材料,选择性结合糖肽,并通过特定洗脱条件将其分离纯化。该试剂盒适用于多种样品来源(如细胞裂解液、组织提取物、血浆等)的酶解产物,能够快速、高效地从复杂肽段混合物中富集N-糖肽或O-糖肽。
产品采用材料+Tip形式,使用方便,无需专业设备,适合常规实验室操作。富集后的糖肽可直接用于LC-MS/MS分析,广泛适用于蛋白质组学、糖组学、疾病标志物筛选等研究领域。
产品组分
|
产品组分 |
规格 |
储存条件 |
|
Buffer A |
20ml×1 |
室温(RT) |
|
Buffer B |
5ml×1 |
室温(RT) |
|
材料 |
70mg×1 |
室温(RT) |
|
Tip |
12根 |
室温(RT) |
使用方法
百泰派克生物科技的糖基化修饰肽段富集试剂盒采用固相亲和层析技术,结合优化的缓冲体系与操作流程,可在较短时间内高效完成糖肽的选择性富集。整个实验流程无需复杂设备,适合日常实验室条件下操作。建议每次使用100 μg酶解肽段样品,富集后即可用于下游质谱分析。
1、蛋白样品酶解(预处理)
(1)建议起始蛋白量为200–300 μg。
(2)对样品进行还原(如DTT)与烷基化(如IAM)处理,消除二硫键干扰;
(3)使用胰蛋白酶进行酶解(推荐酶与底物比例为1:50),于37℃孵育12–16小时;
(4)酶解结束后样品应为澄清肽段溶液。
注:可使用C18固相材料或Stage-tip去除过量盐分及小分子污染,提高富集效率(可选)。
2、富集材料预处理(亲和材料活化)
取所需量的富集材料,建议使用量80 μg肽段对应5mg填料:
(1)使用Buffer A洗涤材料2–3次,使材料达到结合活性状态;
3、糖肽结合反应
(1)将肽段溶液用200 μL Buffer A重悬后加入已活化的富集材料中;
(2)轻柔混匀(如在旋转器上摇动或轻微涡旋);
(3)室温孵育60分钟,确保糖肽与亲和材料充分结合;
注:孵育过程中建议保持轻微混匀状态,避免沉降。
4、洗涤杂质
(1)将结合糖肽的材料转移至Tip上
(2)使用Buffer A清洗富集材料3次;
(3)每次洗涤使用等体积洗涤液,彻底去除未结合肽段与非特异性杂质;
5、糖肽洗脱
(1)加入Buffer B 80μL,解离糖肽与亲和材料之间的结合;
(2)室温孵育5–10分钟,重复4次收集洗脱液;
(3)合并洗脱液,即为富集糖肽部分。
6、可选步骤 – 浓缩与脱盐
洗脱液蒸干后可直接用于质谱分析,或先进行脱盐(如使用C18脱盐柱);
时间与兼容性说明
(1)操作总时长:约2.5–3小时
(2)适配样本类型:人/动物细胞、组织、血清、血浆等来源的蛋白酶解产物
(3)适配分析平台:各类LC-MS/MS系统,如Orbitrap、TOF、Q-Exactive 等
此优化流程可确保糖肽的高效富集与低损失,显著提升质谱分析中糖基化肽段的信噪比和识别深度,适用于常规糖蛋白质组学及翻译后修饰研究需求。
产品优势
✅ 高选择性识别
专为糖肽结构设计的亲和材料,确保与N-糖或O-糖特异性结合,有效提升富集效率。
✅ 提高质谱检测灵敏度
富集步骤显著降低非糖肽背景干扰,增强糖肽在MS/MS分析中的信号强度和识别率。
✅ 操作简便
提供完整的预配试剂,免除复杂准备工作,适用于手动与自动化操作系统。
✅ 多种样品兼容性
适用于细胞、组织、血清、血浆等多种样本来源,满足多领域研究需求。
✅ 时间效率高
整个流程设计高效,富集与洗脱步骤快速,适合高通量实验应用。
应用场景
百泰派克生物科技的糖基化修饰肽段富集试剂盒广泛应用于以下研究领域:
1、糖基化修饰分析
富集N-糖肽、O-糖肽用于识别糖基化位点,研究糖基化在疾病中的作用。
2、疾病标志物发现
通过富集低丰度糖肽,提高血清或组织样本中潜在生物标志物的检测概率。
3、蛋白质组学研究
辅助构建更完整的蛋白组图谱,揭示翻译后修饰对蛋白功能的调控。
4、生物制药质量控制
用于抗体或重组蛋白产品中糖基化状态的分析与监测。
5、癌症、免疫、自身免疫疾病等机制研究
探索糖基化在病理过程中的作用,为机制解析提供分子线索。
百泰派克生物科技的糖基化修饰肽段富集试剂盒为糖基化修饰研究提供了一种高效、便捷、可靠的解决方案。通过优化的亲和捕获机制与流程化操作方式,该产品可显著提升糖肽检测的灵敏度与数据质量,是蛋白质组学和糖组学研究中的重要工具。我们致力于为科研工作者提供高性能的样品前处理耗材,助力生命科学研究不断突破。如需我们的产品、定制方案或技术支持,欢迎联系百泰派克生物科技团队。
FAQs
Q1: 该试剂盒适用于哪种糖基化类型?
A1: 百泰派克生物科技提供不同版本的糖基化修饰肽段富集试剂盒,分别适用于N-糖肽和O-糖肽的富集,可根据研究需求选配。
Q2: 是否兼容带有其他翻译后修饰的肽段?
A2: 本试剂盒主要针对糖基化结构进行富集,若样品中含有其他修饰(如磷酸化、乙酰化),建议进行相应的分离策略整合。
Q3: 富集后是否需要再次纯化?
A3: 洗脱后的糖肽纯度已可满足大多数质谱实验,如对分析纯度要求更高,可选择进行脱盐或浓缩处理。容
Q4: 试剂盒是否可以重复使用?
A4: 本产品为一次性使用型,保证每次实验的重现性和准确性,不建议重复使用。
Q5: 样品量是否有限制?
A5: 推荐上样总肽量为100 μg,适合常规蛋白质组学实验,亦可根据需要进行规模调整。












