乳酸化修饰肽段富集试剂盒

产品组分	规格	储存条件
Wash buffer 1	30ml×1	4℃
Wash buffer 2	30ml×1	4℃
Wash buffer 3	30ml×1	4℃
Elution buffer	3ml×1	4℃
抗体	50µL×1	-20℃
Beads	2ml×1	4℃

使用方法

本试剂盒采用专门设计的乳酸化结合材料，整个实验流程简便，耗时短，适用于不同的实验室环境和实验规模。以下为推荐使用的标准化步骤。

肽段水平乳酸化富集流程

1、样品准备

（1）将酶切后的蛋白样本进行C18柱或等效方式脱盐，并冷冻干燥。

（2）建议起始量为>2 mg蛋白酶解产物，重悬于Wash buffer 2中，确保肽段完全溶解。

2、beads与抗体结合

（1）先用Wash buffer 1清洗beads材料，重复两次；

（2）用200µL Wash buffer 1重悬beads，将适量的抗体加入，4℃旋转孵育2h；

（3）离心分离beads，保留上清。

注：建议使用BCA方法对孵育后上清进行定量，确保抗体全部结合

3、肽段孵育

将重悬后肽段加入beads沉淀中，4℃旋转孵育2h

4、洗涤杂质

（1）离心分离beads；

注：用户可根据自身需求决定是否保留去除乳酸化修饰的肽段溶液

（2）将beads用Wash buffer 2洗涤两次，保留beads；

（3）再用Wash buffer 3洗涤两次，保留beads；

5、洗脱乳酸化肽段

（1）更换新的收集管，加入100 µL Elution Buffer，室温孵育10分钟，离心收集，再加入100 µL Elution Buffer 2，重复一次，共200 µL。

（2）将富集后的泛素化肽段样本进行C18柱或等效方式脱盐，并冷冻干燥。

6、下游分析

使用20 µL 0.1%甲酸重悬干燥产物，直接用于LC-MS/MS分析或肽段浓度测定。

注意事项

1、实验操作时须在低温下进行，如4℃条件下进行，防止修饰丢失。

2、所用裂解缓冲液必须新鲜配制，并添加合适的抑制剂；

3、富集后样品可通过超滤、透析等方式进行缓冲液更换或浓缩处理；

4、使用前充分混匀beads，避免沉淀不均导致富集效率波动。

产品优势

✅ 高特异性与高效性

试剂盒采用高亲和力的乳酸化结合抗体或乳酸化结合结构域，能精准识别乳酸化赖氨酸残基，有效减少非特异性结合，提高目标蛋白富集纯度，为后续质谱分析和免疫学实验提供更清晰的数据。

✅ 高回收率

优化的结合与洗脱体系确保高效捕获低丰度乳酸化修饰肽段，具备良好的回收能力，特别适用于复杂样本中乳酸化修饰的深度挖掘和低表达位点的研究。

✅ 快速简便

流程简化，操作便捷，整个富集过程大约一天内完成，无需额外添加试剂或复杂设备，适合常规实验室和自动化平台使用。

✅ 样本适用性广

适用于哺乳动物细胞、组织匀浆等多种样本来源，支持人、小鼠、大鼠等常见研究模型，拓宽实验应用场景。

应用

1、乳酸化蛋白质组学研究

用于大规模乳酸化蛋白质组学研究，帮助科研人员识别和定量乳酸化修饰的蛋白，为乳酸化修饰组图谱的构建提供支持。

2、细胞代谢与能量调控研究

乳酸化修饰与细胞代谢密切相关，使用该试剂盒富集乳酸化肽段可以深入研究乳酸化在细胞能量代谢、氧化还原反应等过程中的作用。

3、低丰度乳酸化修饰信号挖掘

在细胞或组织中乳酸化修饰常以低丰度存在，使用该试剂盒富集后进行靶向质谱验证，可有效提高检测灵敏度，应用于早期诊断标志物开发等研究方向。

4、免疫调节与炎症反应

乳酸化在免疫细胞活性调节中扮演重要角色，通过富集乳酸化肽段，可以研究乳酸化在免疫反应、炎症中的具体作用。

5、肿瘤代谢研究中的乳酸化修饰筛选

在肿瘤细胞中，糖酵解活性显著增强，乳酸大量积累，诱导多种代谢相关蛋白发生乳酸化修饰。通过本试剂盒富集乳酸化蛋白，可用于探索肿瘤微环境中的代谢重编程机制，发现潜在乳酸化靶点及抗肿瘤策略。