• PNGase F(测序级)
  • 货号: MSP-PR05
  • 产品类型: 蛋白消化酶
  • 规格: 5 x 20μg
  • 蛋白质糖基化是一类关键的翻译后修饰(PTM),在细胞信号传导、蛋白稳定性、免疫反应以及细胞间通讯等众多生物学功能中发挥重要作用。其中,N-糖基化(N-glycosylation)因其广泛性和复杂性,一直是蛋白质组学研究的热点之一。为准确解析糖蛋白结构及功能特性,常需去除蛋白质中的N-连接型糖链,以进一步开展蛋白质本身及释放糖链的研究分析。肽-N-糖苷酶F(PNGase F)是一种极为高效的糖苷酶,能够特异性去除N-糖基化蛋白中的高甘露糖型、杂合型及复杂型寡糖链,使蛋白质样品更易于后续分析。
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蛋白质糖基化是一类关键的翻译后修饰(PTM),在细胞信号传导、蛋白稳定性、免疫反应以及细胞间通讯等众多生物学功能中发挥重要作用。其中,N-糖基化(N-glycosylation)因其广泛性和复杂性,一直是蛋白质组学研究的热点之一。为准确解析糖蛋白结构及功能特性,常需去除蛋白质中的N-连接型糖链,以进一步开展蛋白质本身及释放糖链的研究分析。肽-N-糖苷酶F(PNGase F)是一种极为高效的糖苷酶,能够特异性去除N-糖基化蛋白中的高甘露糖型、杂合型及复杂型寡糖链,使蛋白质样品更易于后续分析。

 

作为蛋白质样品制备领域领先的耗材供应商,百泰派克生物科技提供的PNGase F(测序级),以高纯度、高活性与高兼容性满足科研实验需求,助力糖蛋白研究。

 

产品详情

肽-N-糖苷酶F(Peptide-N-Glycosidase F)是一种来源于脑膜败血性黄杆菌(Flavobacterium meningosepticum)的特异性酰胺酶,专门识别并高效剪切N-连接型糖蛋白的最内侧N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)与天冬酰胺(Asn)残基之间的连接。PNGase F能够有效地去除高甘露糖型、杂合型和复杂型寡糖链,完整释放糖链结构,不破坏糖链的完整性,极大便利了后续的糖链结构和功能分析。如下图所示,PNGase F能够有效切割核心α1-6岩藻糖(Fucose)修饰的糖链,但对核心α1-3岩藻糖修饰的糖链则无法切割,体现出高度底物选择性。

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来源:维基百科

图1. PNGase F切割

 

产品组分

本产品经过严格质控,不含任何可检测的内切糖苷酶(Endoglycosidase F1、F2、F3)及其他蛋白酶污染,纯度达到95%以上,经SDS-PAGE和完整ESI-MS确认。

 

产品规格

50 uL,10 units/uL

Buffer组成

20mM Tris-HCl,pH=7.5,50mM NaCl,5mM EDTA

分子量

35 kDa

储存条件

2-8 ℃ 保存

最佳pH

6.0-10最佳 pH 为 8.6

保质期

2-8℃保存12个月

  

产品特点

1、特异性强

专一性去除高甘露糖型、杂合型和复杂型N-糖链,不影响O-连接型糖链结构。

2、高纯度、低背景

HPLC纯度≥99%,无其他酶类污染,保证实验结果精准可控。

3、活性

40000 units/min/mg。

4、实验适应性强

可在天然或变性条件下使用,适配多种样品和实验流程。

5、完整释放糖链

糖链结构完整,适于后续糖组学分析和功能研究。

 

使用方法

1、推荐酶解条件

  • 酶蛋白比例(单位酶活:μg蛋白):通常为2ul酶:20ug蛋白,溶液体系推荐20uL。

  • 最佳pH=8.6,最佳温度:37℃

  • 酶解时间:4–18小时,根据糖蛋白结构及状态调整。

2、反应终止方法

  • 降温至-20℃以下或加入SDS-PAGE样品缓冲液终止反应。

  • 脱糖后的蛋白质适合用于SDS-PAGE、Western blot、质谱分析及氨基酸测序。释放的糖链则可用于色谱及质谱鉴定与分析。

 

应用

1、糖蛋白结构与功能研究

去除N-糖链,助力解析糖基化对蛋白功能的影响。

2、蛋白质组学研究

消除糖链干扰,提升质谱鉴定的分辨率和准确性。

3、生物药物质量控制

分析糖基化异质性,评估药物的稳定性、活性及免疫原性。

4、糖链结构解析与糖组学研究

完整释放糖链,便于进行高精度糖组学表征。

 

百泰派克生物科技提供的PNGase F(测序级)酶以高纯度、高效性和稳定性,助力蛋白质糖基化相关研究。该酶的特异性、纯净度与稳定性能确保实验结果准确可靠,广泛适用于糖蛋白结构解析、蛋白质质谱分析、生物药品研发及糖组学研究领域,是实验室研究糖蛋白不可或缺的重要工具。

FAQs

Q1: PNGase F处理后样品可否直接用于质谱分析?

A1: 是的,经PNGase F处理后的样品完全适用于质谱分析,无需额外复杂步骤。

Q2: PNGase F可否去除所有类型的糖链?

A2: PNGase F仅针对N-连接型糖链中的高甘露糖型、杂合型与复杂型糖链有效,不可去除含核心α1-3岩藻糖(α1-3 Fucose)结构的糖链,也不适用于O-连接型糖链的去除。

Q3: 使用PNGase F时为何需要加入NP-40?

A3: PNGase F的活性会被SDS抑制,加入非离子去污剂NP-40可有效抵消SDS的抑制作用,保证酶促反应顺利进行。

Q4: 如何确认糖链去除完全?

A4: 可通过SDS-PAGE观察蛋白质分子量变化初步确认,也可通过质谱技术精准确定糖链去除效果。

Q5: PNGase F和Endo-H的区别在哪里?

A5: PNGase F适用范围广泛,可去除所有类型的N-糖链(除核心α1-3 Fucose外),Endo-H仅适用于高甘露糖型和部分杂交型糖链。

Q6: 适用样品类型有哪些?

A6: 适用于多种来源的糖蛋白样品,如细胞裂解液、血清/血浆、重组蛋白及免疫沉淀产物等。

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