rProtein A琼脂糖填料

该产品结合经过优化的配体构象和高性能基质，具备良好的流速兼容性与高结合能力，适用于从实验室规模到中试级别的抗体纯化应用。

使用方法

1、细胞回收和蛋白提取

（1）贴壁细胞移去培养基，按每1.0×106个细胞150 µL的比例用1×PBS洗涤两次；

（2）用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5 mL EP管内；

（3）按每1.0×105个细胞20~30 µL 的比例加入蛋白裂解液，同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM 的PMSF)；

（4）混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液(4℃, 14000 g，10 min)，置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）

2、磁珠预处理

（1）将rProtein A磁珠漩涡振荡1 min，使磁珠充分振荡重悬；

（2）取25~50 µL 磁珠悬液置于1.5 mL EP 管中；

（3）加入200 µL 蛋白裂解液洗涤，弃上清液，保留beads，重复洗涤一次；

（4）最后加入200 µL 蛋白裂解液重悬磁珠以备用。

3、抗体结合反应

（1）抗体工作液的制备：用蛋白裂解液稀释抗体样品，配制成终浓度为 5~50 µg/mL 抗体工作液，置于冰上备用。

（2）抗体吸附：将上步骤预处理的磁珠悬液进行磁性分离，弃上清液；

（3）加入 200 µL 抗体工作液，迅速重悬后在室温下置于翻转至少1 h后进行beads分离；

（4）洗涤：向EP 管中加入200 µL 蛋白裂解液洗涤，用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体复合物均匀分散， 弃上清液；

（5）重复以上洗涤操作一次。

4、抗原沉淀反应

（1）抗原吸附：加入步骤1制备的抗原样品（抗原用量以抗体推荐比例为参考），用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散；

（2）在4℃下置于翻转混合仪过夜孵育，使抗原与抗体充分结合；

（3）洗涤与转移：将上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行分离，收集结合后磁珠；

（4）向 EP 管中加入 200 µL 洗涤缓冲液洗涤，用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散；

（5）弃上清液；从磁性分离器上取下 EP 管，再重复洗涤两次。最后加入 200 µL 洗涤缓冲液重悬beads；

5、抗原洗脱

以下两种抗原洗脱方案，可根据后期检测的需要选择不同的抗原洗脱方法。

（1）变性洗脱法：此法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。从磁性分离器上取下 EP 管，向其中加入 25 µL 1× SDS-PAGE Loading Buffer（自备）混合均匀，95℃加热5 min，结束后进行SDS-PAGE 检测。

（2）非变性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。向beads中加入50-100 µL 洗脱缓冲液混合均匀，室温孵育10 min。收集上清液至新的EP 管，并立即加入中和缓冲液将洗脱产物pH 调至中性，用于后期功能分析。

产品优势

✅ 高结合容量

采用优化偶联策略，支持多种IgG亚型和Fc融合蛋白的高效结合，适合高通量样本处理。

✅ 优良流速性能

颗粒均匀，流动阻力小，适配低压系统（如AKTA、BioLogic）及常规手动柱使用。

✅ 化学稳定性强

在pH 3–10范围内性能稳定，支持0.1–0.5 M NaOH碱洗再生，适用于多次重复使用。

✅ 表现稳定，批间一致性好

采用大肠杆菌表达的重组Protein A，来源清晰，减少批次差异与动物源污染风险。

✅ 多应用兼容性

适用于免疫沉淀、免疫共沉淀、抗体捕获等多种实验需求，可平滑拓展至中试生产阶段。

应用

1、单克隆/多克隆抗体纯化

适用于小试规模抗体制备、验证与分析。

2、Fc融合蛋白纯化

对含Fc结构域的融合蛋白具有良好的结合能力。

3、免疫沉淀与共沉淀实验

支持蛋白互作研究与下游Western blot验证。

4、天然抗体提取

可从血清、腹水等复杂样本中分离IgG。

5、中试或生产工艺开发

兼容工艺放大，适配不同层析系统。

如需获取产品手册、操作指南或技术支持，欢迎联系百泰派克生物科技。我们将为您的抗体纯化与蛋白互作研究提供专业解决方案与优质耗材支持。