蛋白质分子量测定可尝试的 6 种有效方法

随着蛋白质研究的不断发展，蛋白质分子量测定方法也在不断优化和创新。百泰派克生物科技在此为您介绍蛋白质分子量测定可尝试的 6 种有效方法，以提高测定的准确性、灵敏度和适用性，适应不同类型的蛋白质样本。

 

1、 蛋白质分子量测定方法之质谱法（Mass Spectrometry, MS）

(1) MALDI-TOF-MS（基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱）

适用范围：

• 适用于小分子蛋白（一般 ≤100 kDa）。

• 适合纯化的蛋白或简单蛋白混合物。

优点：

• 高精度（误差<0、01%）

• 快速测定蛋白分子量

• 适用于单个蛋白质的分析

局限性：

• 对大蛋白（>100 kDa）或复杂样本解析能力较差

• 需要纯化的样品，杂质可能影响测定

 

(2) ESI-MS（电喷雾电离质谱）

适用范围：

• 适合测定大分子蛋白及蛋白复合物。

• 适用于原核和真核表达的蛋白。

优点：

• 适用于蛋白质复合物、翻译后修饰（PTMs）分析

• 分辨率高，可测多电荷分布

局限性：

• 需要优化去盐处理，以减少信号干扰

• 对于高度聚集或膜蛋白样本，离子化效率较低

 

2、 蛋白质分子量测定方法之尺寸排阻色谱-多角度光散射法（SEC-MALS）

适用范围：

• 适合蛋白质复合体、聚集体和结构变化分析。

• 适用于非变性条件下的蛋白研究。

优点：

• 直接测定溶液中蛋白的真实分子量（误差<5%）

• 可区分不同构象或聚集状态的蛋白

局限性：

• 需要高纯度样品，避免非特异性结合导致测定偏差

• 适用于较大蛋白，小蛋白精度可能受限

 

3、 蛋白质分子量测定方法之超速离心分析（Analytical Ultracentrifugation, AUC）

适用范围：

• 适用于蛋白质复合物、聚集状态和结合亲和力分析。

• 可在生理条件下测定蛋白分子量。

优点：

• 提供溶液中蛋白的真实分子量，避免样品变性影响

• 适用于大分子蛋白、蛋白复合物及翻译后修饰蛋白

局限性：

• 实验时间较长，设备成本较高

• 需要优化实验条件（如 pH、离子强度等）

 

4、蛋白质分子量测定方法之SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）与 Western Blot

适用范围：

• 适用于常规蛋白分子量估算（误差 5%-10%）。

• 适合粗略判断蛋白的纯度。

优点：

• 操作简单，实验成本低

• 适用于检测不同样本的蛋白表达水平

局限性：

• 不能提供高精度分子量数据

• 变性条件下可能影响蛋白迁移率，导致误差

 

5、 蛋白质分子量测定方法之纳米孔测序法（Nanopore-based Single Molecule Analysis）

适用范围：

• 适用于检测单个蛋白分子及其分子量分布。

• 适用于超高分辨率的蛋白质研究。

优点：

• 直接测定蛋白的大小和分子量，无需标记

• 适用于复杂样本或异质性蛋白混合物

局限性：

• 目前仍处于发展阶段，商用设备较少

• 需要优化纳米孔的大小和蛋白通过速度

 

6、蛋白质分子量测定方法之 X 射线小角散射（Small-Angle X-ray Scattering, SAXS）

适用范围：

• 适用于蛋白溶液中的结构和分子量测定。

• 适合无晶体结构蛋白的分析。

优点：

• 可测定蛋白的分子量及形态信息

• 不需要蛋白晶体，适用于结构研究

局限性：

• 需要高质量的样品制备

• 数据解析较复杂，精度受实验条件影响

 

结论：如何选择合适的方法？

随着蛋白质研究的深入，多种蛋白质分子量测定方法可互相结合，以获得更精准的数据。

• 如果关注高精度测定：建议使用质谱法（MALDI-TOF-MS 或 ESI-MS）。

• 如果需要研究蛋白复合体：SEC-MALS 和 AUC 是最佳选择。

• 如果样本较复杂，需无损测定：纳米孔测序法将是未来的趋势。

• 如果关注蛋白形态：SAXS 可提供额外结构信息。

 

结合多种蛋白质分子量测定方法，可有效提高蛋白质分子量测定的准确性，助力精准生物研究和生物医药开发。百泰派克生物科技致力于提供先进的蛋白质分析服务，包括蛋白质分子量测定可尝试的6种有效方法。我们结合质谱、光散射、超速离心、等电聚焦和尺寸排阻色谱的优势，为客户提供精准、高效的蛋白质分子量测定解决方案。我们的专业团队将根据您的需求，定制最佳的分析策略，助力您的研究与开发。欢迎与我们合作。

 

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