蛋白质组学研究依赖于高效的样品制备流程,样品的制备质量直接影响下游分析的准确性,特别是在蛋白互作研究、翻译后修饰分析和低丰度蛋白鉴定等实验中,酶解效率与回收率尤为关键。传统蛋白酶解方法主要包括溶液内酶解(In-solution digestion)和凝胶内酶解(In-gel digestion)。溶液内酶解适用于相对纯化的蛋白溶液,但在复杂样品(如细胞裂解物、免疫共沉淀富集蛋白等)中,由于高浓度去污剂和盐的干扰,可能影响酶活性,导致酶解不完全或效率下降。而凝胶内酶解通常用于SDS-PAGE分离后的蛋白质鉴定,尽管可以降低干扰,但蛋白提取回收率较低,特别是对于低丰度蛋白来说,样品损失较为严重。
为了提高蛋白质酶解的效率、减少非特异性干扰并提升样品回收率,近年来,磁珠结合蛋白酶解(On Beads Digestion)技术逐渐受到关注。这种方法主要用于蛋白互作研究(如免疫共沉淀 Co-IP、Pull-down 试验)、标签蛋白富集(His-tag/Ni-NTA 纯化等)以及低丰度蛋白富集实验中。相比传统酶解方法,磁珠结合酶解能够直接在磁珠表面进行蛋白水解,减少了样品转移过程中的损失,并且提高了低丰度蛋白的检测灵敏度。此外,该方法能够有效降低污染背景,如未结合的高丰度蛋白或缓冲液成分的干扰,使得下游质谱分析更加精准可靠。
产品详情
基于磁珠结合蛋白酶解技术的优势,百泰派克生物科技推出了 On Beads 蛋白酶切试剂盒,旨在为研究人员提供一种高效、稳定、易操作的蛋白酶解方案。本试剂盒专为磁珠结合蛋白样品设计,采用优化的酶解策略,使蛋白质在磁珠表面直接完成水解,无需额外洗脱步骤,从而减少样品损失,提高低丰度蛋白的检测灵敏度。其优化的缓冲体系能够避免高盐、去污剂等残留对酶解反应的影响,从而有效提高酶活性和蛋白质酶解效率,确保实验的高重复性和稳定性。特别适用于免疫共沉淀(Co-IP)、标签蛋白富集(His-tag/Ni-NTA)、蛋白复合物解析等实验,能够有效提升蛋白质鉴定的覆盖率和准确性,后续兼容液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)的高灵敏度分析平台。
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产品组分 |
浓度 / 质量 |
规格 |
储存条件
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Beads A |
50 μg/μL |
5 mL |
4℃ |
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Beads B |
50 μg/μL |
5 mL |
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磁珠孵育液 |
1× |
30 mL |
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磁珠洗涤液 |
1× |
500 mL |
操作方法
百泰派克生物科技的On Beads蛋白酶切试剂盒采用优化的磁珠结合蛋白质酶解流程,简化实验操作,减少蛋白损失。操作步骤如下:
1、前处理后样本要求
蛋白总量≥50μg,蛋白浓度≥1μg/μL,已还原烷基化
2、清洗beads
(1)将beads A 和beads B以1:1比例混合,轻微涡旋震荡30s混匀,置于磁力架上,静置2min,弃上清。
(2)加入1mL超纯水,轻微涡旋震荡30s,置于磁力架上,静置2min,弃上清,清洗三次。
(3)最后用水配置成100μg/μL的beads储液,4℃储存。
3、SP3富集
以100ug蛋白为例,按下表加入Beads和磁珠孵育液,实际实验可等比例增减。加入后于室温(24℃)900rpm结合15min。
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样品反应体积 |
Beads 体积 |
磁珠孵育液 |
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100 μL |
10 μL |
110 μL |
4、SP3漂洗
(1)瞬时离心,将样本置于磁力架上,静置2min,用移液器转移上清至新管,上清可于-80℃保存。
(2)在beads中加入500μL磁珠洗涤液,吹打混匀后,将样本置于磁力架上,静置2min,弃上清;总计漂洗3次,最后一次漂洗完成后需将磁珠洗涤液去除干净,室温干燥20~30min。
注:室温干燥至beads表面无透亮液体即可,时间不宜过长。
5、SP3酶切
(1)加入300μL酶切消化液(消化液种类根据所用酶种类进行调整),于室温1000rpm 震荡5min,使beads完全散开。
(2)按比例加入所需种类酶,1000rpm,过夜酶切,14h≤酶切时间≤18h。
6、回收酶解液
瞬时离心,将酶切后样本置于磁力架上,静置2min,用移液器转移上清至新管。回收的酶解液可用于后续纯化步骤(可选),如C18柱富集或过滤。
应用
1、免疫共沉淀(Co-IP)蛋白鉴定
适用于 Co-IP 实验中直接在磁珠上酶解,提高互作蛋白的鉴定效率。
2、亲和纯化蛋白质分析
用于 His-tag、GST-tag 或 Ni-NTA 等亲和纯化后的蛋白样品,减少洗脱步骤带来的蛋白损失。
3、翻译后修饰(PTM)蛋白检测
可用于磷酸化、乙酰化、泛素化等修饰蛋白的富集样品,确保高效酶解,提高修饰位点鉴定的准确性。
FAQs
Q1: On Beads蛋白酶切试剂盒相比传统溶液内酶解方法有哪些优势?
A1: 传统溶液内酶解容易造成低丰度蛋白的丢失,且洗脱过程中可能引入额外的背景干扰。而百泰派克生物科技的On Beads蛋白酶切试剂盒允许蛋白质直接在磁珠表面进行酶解,无需额外洗脱步骤,有效减少样品损失,确保高效、精准的蛋白消化,特别适用于蛋白互作研究、低丰度蛋白检测和翻译后修饰分析。
Q2: 该试剂盒适用于哪些类型的磁珠结合蛋白样品?
A2: 本试剂盒兼容多种常见的磁珠结合实验,包括免疫共沉淀(Co-IP)、亲和纯化(His-tag/Ni-NTA)、GST-tag、Streptavidin-biotin 结合体系及其他标签蛋白富集方法。无论是研究蛋白互作,还是进行复合物解析,均可确保高效的蛋白酶解和优异的质谱兼容性。
Q3: 试剂盒是否兼容 LC-MS/MS 质谱分析?
A3: 是的,该试剂盒专为高灵敏度蛋白组学分析设计,采用优化的酶解缓冲液和高纯度蛋白酶,确保酶解产物可直接用于LC-MS/MS检测。经过严格测试,该方法能够显著提高蛋白质鉴定覆盖度和数据稳定性,是高通量蛋白组学研究的理想选择。












