溶液蛋白酶切试剂盒

产品组分	规格	储存条件
DTT（1M）	1 mL	-20℃
IAM（1M）	1 mL
Trypsin酶	25 μg/瓶；10瓶
Trypsin酶稀释液	3 mL	4℃

 

使用方法

百泰派克生物科技的溶液蛋白酶切试剂盒提供优化的溶液酶解方案，可在短时间内完成蛋白消化，整个实验流程简单高效，适用于不同的实验室环境和实验规模，以下为推荐使用的标准化步骤，研究人员可以根据实验需求调整酶解时间。

 

1、蛋白样品制备

取适量蛋白样品（确保蛋白浓度满足实验需求），加入适量缓冲液溶解。

注：若蛋白中含有SDS、盐等干扰物，可进行超滤浓缩、丙酮沉淀或透析以去除杂质。

  

2、还原与烷基化

以100μL蛋白溶液样品为例，实际可按比例增加或减少如下试剂：

（1）还原：用移液器准确移取1μL 1M DTT溶液加入样品中，使DTT终浓度为10 mmol/L，于56℃水浴中还原1 h。

（2）用移液器准确移取2μL 1M IAM溶液加入样品中，使IAM终浓度20 为mmol/L，暗处室温反应40 min。

（3）用移液器准确移取1μL 1M DTT溶液加入样品中，使DTT终浓度为10 mmol/L，以中和未反应的IAM。

  

3、胰蛋白酶（Trypsin）酶解

（1）按 1:50 (w/w) 的Trypsin：蛋白比例加入胰蛋白酶（酶浓度：0.25 μg/μL）。轻轻混匀，避免剧烈震荡导致酶失活 。

（2）在37°C 恒温培养箱中孵育3~4小时或过夜（12~16小时，适用于完全消化），确保蛋白质充分酶解为肽段。

（3）终止酶解：可加入1%甲酸或0.5%TFA终止酶解，抑制蛋白酶活性。

   

4、肽段纯化及检测（可选）

（1）使用 C18 固相萃取（SPE）纯化肽段，去除盐和杂质，提高质谱灵敏度。

（2）可直接用于LC-MS/MS 质谱分析、蛋白组学研究及蛋白功能验证。

  

5、肽段保存

（1）短期保存（1～2周）：置于-20℃下保存。

（2）长期保存（>2周）：-80℃超低温保存，避免反复冻融以防止降解。

   

注意事项

1、确保蛋白无SDS、盐等干扰物。

 

2、Trypsin过量可能导致非特异性酶解，可根据实验需求优化Trypsin比例。

 

3、避免高温孵育引起的蛋白质变性和Trypsin失活。

 

4、终止酶解后若不直接分析需低温（-20℃）保存防止降解。

 

产品优势

1、高效酶解

采用高纯度胰蛋白酶，特异性强，避免非特异性降解，提高降解效率。优化的酶解体系可以确保蛋白质的彻底展开，提高酶切效率。

 

2、适用于多种样品类型

适用于细胞裂解液、组织提取蛋白、血浆蛋白、重组蛋白等样本类型，并兼容不同的蛋白浓度，通过调节酶解参数以适应不同的实验方案。

 

3、高蛋白回收率和数据稳定性

采用溶液酶解可以有效避免凝胶内酶解导致的蛋白损失，提高蛋白回收率。并且经过优化测试后的试剂盒可以保证不同批次间实验数据的高重复性和稳定性。

 

4、即用型试剂

即用型试剂，无需复杂仪器，操作简便，减少实验变量，确保实验数据的可重复性。

   

应用

1、细胞或组织蛋白质的提取后酶解

适用于细胞裂解液、组织匀浆、血清/血浆蛋白等样本的酶解处理。

 

2、蛋白质鉴定

适用于 LC-MS/MS 质谱分析，将复杂蛋白样本酶解为合适的肽段，提高蛋白质鉴定的灵敏度和准确性。

 

3、翻译后修饰（PTMs）分析

适用于磷酸化、乙酰化、甲基化、糖基化等翻译后修饰研究，结合富集策略可提高修饰肽的检测能力。

 
 
4、蛋白定量分析

适用于Label-Free、TMT、iTRAQ 等蛋白质组学定量策略，可对不同实验条件下的蛋白表达进行分析。