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蛋白质谱iTRAQ分析

蛋白质谱iTRAQ分析指的是同时利用iTRAQ标记技术和质谱技术对蛋白质进行分析的一种技术,主要用于定量蛋白质组学分析中。百泰派克生物科技提供基于质谱的蛋白iTRAQ分析服务。

蛋白质谱iTRAQ分析

蛋白质谱iTRAQ分析指的是将iTRAQ标记技术和质谱技术结合对蛋白质进行分析的一种分析技术。iTRAQ (Isobaric tag for relative and absolute quantitation)是由AB SCIEX公司开发的一种多肽体外标记技术。在定量蛋白质组学中,iTRAQ采用多种同位素标签(4种或8种),可以标记单个实验中有不同来源的蛋白质酶消化后的肽段N端,然后将这些肽段进行串联质谱分析,可同时比较多种不同来源中蛋白质的相对和绝对含量。

蛋白质谱iTRAQ分析原理

iTRAQ标签主要由三部分构成:报告基团,平衡基团和肽反应基团。其中,报告基团和平衡基团一起组成等重标签。不同标签的报告基团的重量不同,用于指示蛋白样品的丰度水平。平衡基团则用于平衡报告基团的质量差,使等重标签重量一致,保证标记的同一肽段的m/z相同。肽反应基团则用于与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接,从而标记上肽段。

在蛋白质谱iTRAQ分析中,蛋白质首先被裂解为肽段,然后用iTRAQ试剂进行差异标记。由于iTRAQ试剂是等量的,标记的同一多肽在第一级质谱检测中分子量是完全相同的,因此需通过第二级质谱进行分析。在二级质谱分析过程中,报告基团、平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂,平衡基团丢失,不同报告基团离子强度的差异就代表了它所标记的多肽的相对丰度。同时,多肽内的酰胺键断裂,得到碎片离子的质量,通过数据库查询和比较,可以鉴定出相应的蛋白质。

相关服务

TMT/iTRAQ/MultiNotch定量蛋白组学分析

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