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用于质谱分析的蛋白质制备

用于质谱分析的蛋白质制备方法很多,只要制备过程中尽量使用不影响后续质谱分析的溶液或试剂,尽量避免外来蛋白污染即可。百泰派克生物科技除了提供蛋白质谱分析外,也可提供1D 或2D SDS-PAGE服务、蛋白质CO-IP免疫共沉淀法技术服务和GST融合蛋白pull-down沉降技术服务。

用于质谱分析的蛋白质来源

用于质谱分析的蛋白质可以来源于多种样品,这些样品可以是动植物细胞和组织、微生物细胞、血清、血浆和尿液等,也可以是实验得到的纯化蛋白、蛋白胶条和胶点、染色(包括银染、考染、荧光和锌、铜染色等类型)后的蛋白胶条和胶点、IP和Co-IP样品,以及pull down实验得到的蛋白等。

用于质谱分析的蛋白质制备注意事项

为了提高后续质谱鉴定的准确度,用于质谱分析的蛋白质常常在制备过程中需要注意以下几点:

1.关于银染的样品,请不要进行脱色处理,且银染的样品有可能与后续的质谱分析不兼容,推荐使用下面的产品或者实验步骤进行银染实验:ProteoSilver Plus, Sigma (Product # PROTSIL1 or PROTSIL2);Dodeca Silver Stain, BioRad (Product # 161-0481 or 161-0480)。

2.关于液体样品(In solution format),当样品中蛋白量大于10ug时对样品的缓冲体系没有要求;当样品中蛋白量小于10ug时,样品准备过程中请尽量减少SDS等表面活性剂的使用,并注意降低盐浓度;在提交样品时,请提供样品的缓冲体系和样品中蛋白的预估含量。

3.关于Co-IP样品,如果是提交洗脱样品,我们推荐使用HPH EB (0.5 M NH4OH, 0.5 mM EDTA) 缓冲体系进行蛋白洗脱,保证洗脱缓冲体系与后续的质谱分析兼容。

4.在样品准备过程中请佩戴手套和头套,尽量避免自身角蛋白(keratin)对样品的污染,尤其是在切胶的时候,且切胶时请尽量避免切下空白凝胶。

相关服务

蛋白质质谱鉴定
蛋白组学

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