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基于SDS-PAGE的蛋白分离

十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)在蛋白表达分析等科研工作中经常用到。可用于获取蛋白质样品的电泳图谱,结合其它基于质谱的蛋白质鉴定服务对样品进行分析或纯化,用于复杂生物样品的蛋白质谱分析。

百泰派克生物科技可根据您的需求,提供基于1D SDS-PAGE或2D SDS-PAGE的蛋白分离服务:基于我司优化的标准操作流程,使用Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra凝胶系统进行1D SDS-PAGE蛋白质分离。将蛋白样品(5-20ug)用上样缓冲液稀释到一定浓度并加热(沸水浴5 min),根据样品的分析目的选择适当浓度的凝胶并将样品上样到凝胶孔中,加入电泳缓冲液,首先在80V电压下恒压分离15min,然后在120V电压下恒压分离60 min。分离后卸下胶板,将凝胶用考马斯亮蓝染色或银染染色。

2D SDS-PAGE蛋白分离使用IPG(pH 3-10)胶进行一维等电点聚焦,SDS-PAGE胶二维电泳进行Mw分离,实现蛋白分离。样品首先使用超滤管进行纯化,并将溶液体系替换为2D lysis buffer (30 mM Tris- HCl, pH 8.8, containing 7 M urea, 2 M thiourea and 4% CHAPS)进行等电点聚焦。聚焦好的胶条胶面朝上放在干的厚滤纸上,挤去多余水分、矿物油及多余样品,用缓冲液溶胀15 min后,将胶条继续在平衡缓冲液中平衡15 min。将胶条胶面朝上放在凝胶的长玻璃板上,使用低熔点琼脂糖封胶后,将凝胶转移至电泳槽中,起始使用低电压,待样品在完全走出IPG胶条,浓缩成一条线后,加大电压,待溴酚蓝指示剂达到底部边缘时即可停止电泳。卸下胶板,将凝胶用考马斯亮蓝染色、银染染色或荧光染色。使用Typhoon TRIO (GE Healthcare)对胶图进行扫描,扫描得到的胶图通过Image Quant software (version 6.0, GE Healthcare)和DeCyder 5.0 (GE Healthcare)进行分析。

百泰派克2D SDS-PAGE示例

百泰派克2D SDS-PAGE示例

关于样品:

1. 液体或固体样品均可。
2. 1D SDS-PAGE一般需要2-30µg蛋白,2D SDS-PAGE一般需要50-1000µg蛋白。
3. 考马斯亮蓝染色、银染染色或荧光染色的蛋白质均可。

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