线粒体是细胞内唯一具有双层膜结构的半自主性细胞器，广泛存在于真核生物的各类细胞中，是细胞能量代谢的核心场所。它不仅主导氧化磷酸化、ATP合成等能量转换过程，还参与脂肪酸代谢、细胞凋亡调控及钙信号调节等多种关键生理活动。线粒体蛋白质作为这些生物学功能的执行者，其表达水平、定位状态、结构构象与翻译后修饰变化，均在生命过程调控与疾病发生机制中占据重要地位。随着线粒体在代谢疾病、神经退行性疾病、肿瘤发生及衰老研究中的研究热度持续升温，获取高质量、高纯度的线粒体蛋白，成为功能组学、结构生物学和转化医学研究的基础环节。然而，线粒体蛋白的提取面临结构复杂，分层提取困难、蛋白种类复杂，性质差异显著、含量低且易被胞质蛋白污染、线粒体易发生自噬或降解等诸多技术挑战。
针对上述难题，百泰派克生物科技研发的线粒体蛋白提取试剂盒在提取效率、蛋白活性保持与杂质去除等关键环节进行系统优化，结合精细的分离流程与高效的缓冲体系，帮助研究人员在各类细胞中稳定提取高质量的线粒体蛋白，为代谢组学、蛋白质组学、疾病机制研究等方向提供坚实可靠的样品准备方案。
产品详情
线粒体蛋白提取试剂盒是一款专为高效提取线粒体蛋白而设计的产品，能够从各种动植物细胞中快速分离出高质量的线粒体蛋白。本试剂盒独特的裂解缓冲液配方，能够有效地溶解细胞膜，并将线粒体从细胞内部分离出来，同时最大程度地保护线粒体蛋白的天然构象和活性。试剂盒内的各类组分，包括细胞裂解液、蛋白提取液和蛋白酶抑制剂等，经过精心优化，能够有效去除细胞内的杂质和其它膜成分，确保提取出的蛋白质量高、纯度好。此外，本试剂盒操作简便，能在短时间内完成提取过程，节省了大量的时间和精力。提取的线粒体蛋白可用于多种下游实验，如Western Blot、免疫共沉淀、酶活性测定、质谱分析（LC-MS/MS）等，为线粒体生物学研究、疾病机制研究和药物筛选等提供重要的实验依据。
产品组分
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产品组分 |
规格 |
储存条件 |
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线粒体分离试剂 |
125mL |
-20ºC 保存一年 |
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台盼蓝染色液 |
10mL |
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线粒体储存缓冲液 |
15mL |
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线粒体裂解缓冲液 |
15mL |
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PMSF（晶体） |
1.5mL（100mM） |
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PMSF（溶剂） |
1.5mL |
使用方法
1、准备溶液
从-20 °C冰箱中取出各试剂，室温解冻，置于冰上备用。 将 1.5 mL PMSF (solvent) 加入 PMSF (crystal) 中，充分溶解，即得 1.5 mL 100 mM PMSF 溶液。配制好的100mM PMSF溶液-20ºC保存。线粒体分离试剂和线粒体裂解缓冲液加入至样本前，加入100 mM PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
2、收集细胞
收集所需细胞，用预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，600×g，4℃离心5分钟，沉淀细胞，弃上清。
3、预处理
每2~5×107个细胞中加入 1-2.5 mL含有PMSF的线粒体分离试剂，轻轻重悬细胞，冰浴 10-15 分钟。
4、匀浆
将细胞悬液转移至匀浆器中，匀浆 10~30下。
注：
（1）需根据细胞类型及匀浆器类型自行优化匀浆次数。
（2）可在匀浆10次后取2 μL细胞匀浆，加入30-50 μL台盼蓝染色液鉴定匀浆效果。若阳性细胞（蓝色）比例不足 80%，增加 5 次匀浆并用台盼蓝染色液鉴定，直至阳性比例超过 80%。 请勿过度匀浆，防止线粒体损伤。
5、沉淀细胞碎片
将细胞匀浆600×g，4ºC 离心 10 分钟。
注：此步离心目的在于去除细胞核、细胞碎片及未裂解细胞。将离心速度提升至 1,000×g 可获得更纯的线粒体，但线粒体抽提率相对下降。
6、分离线粒体
将上清转移至干净的离心管，11,000×g，4ºC 离心10分钟。
注：此步离心目的在于沉淀线粒体。将离心速度改为 3,500 g 可获得更纯的线粒体，但线粒体抽提率相对下降。
7、收获线粒体
弃去上清，所得沉淀即为细胞线粒体。
注：此步骤也可用于获得不含线粒体的细胞浆蛋白。收集本步骤中的上清，12,000×g，4℃ 离心 10 分钟，获得的上清液即为不含线粒体的细胞浆蛋白。 后续可用 BCA 法测定蛋白浓度。
8、线粒体的应用
（1）完整线粒体的功能及酶活研究：每2×10^7个细胞分离得到的线粒体中加入150~200 μL线粒体储存液，重悬备用。
（2）线粒体蛋白分析：每2～5×10^7个细胞分离得到的线粒体中加入150～200 μL临用前添加了PMSF 的线粒体裂解缓冲液。裂解后得到的线粒体蛋白经12,000×g，4ºC，离心3~5 min 后可用于PAGE、WB、IP及酶活测定，也可用 BCA 法测定蛋白浓度。
结果展示
采用本试剂盒提取的线粒体蛋白（Hela细胞）SDS-PAGE胶图
产品优势
✅ 高效提取线粒体蛋白
本试剂盒通过优化的裂解缓冲液配方，能够高效、快速地从细胞中提取线粒体蛋白，并最大程度保留其天然结构和生物学活性。
✅ 保护蛋白天然活性
提取过程中使用了蛋白酶抑制剂，有效防止蛋白降解，并且在低温环境下操作，确保线粒体蛋白在提取过程中不受损害。
✅ 操作简便，时间短
本试剂盒的操作流程简便，能够在短时间内完成线粒体蛋白的提取和纯化，大大节省了实验时间和精力。
✅ 高纯度蛋白提取
本试剂盒通过多次离心分离和杂质去除技术，有效确保提取的线粒体蛋白纯度高，适用于敏感的下游分析。
✅ 兼容多种下游应用
提取的线粒体蛋白可以广泛应用于Western Blot、质谱分析、免疫共沉淀、酶活性测定等多种实验，为线粒体研究提供可靠的实验数据。
应用
1、线粒体功能研究
本试剂盒提取的线粒体蛋白可用于线粒体的功能研究，如能量代谢、氧化还原反应、ATP合成等关键过程。
2、线粒体疾病研究
提取的线粒体蛋白可以用于研究与线粒体相关的疾病，为疾病的诊断和治疗提供重要线索。
3、线粒体生物学基础研究
本试剂盒广泛应用于线粒体生物学的研究，如线粒体动态平衡、线粒体膜蛋白的功能、线粒体基因表达调控等。
FAQs
Q1: 该试剂盒适用于哪些类型的细胞和组织？
A1: 本试剂盒适用于动物细胞、植物细胞以及某些微生物细胞的线粒体蛋白提取。对于组织样本，如肝脏、心脏、肌肉等，建议进行适当的切割和匀浆处理，以便更好地破碎细胞并释放线粒体。
Q2: 样本量不足时是否影响提取效果？
A2: 试剂盒支持微量样本提取，最低仅需1×10^7个细胞或50 mg组织。处理低样本量时，可以按比例减少试剂用量，并缩短孵育时间。
Q3: 实验中出现线粒体蛋白降解如何解决？
A3: 可能原因及对策：1、蛋白酶抑制剂失效：需要现用现加蛋白酶抑制剂，避免长期储存失活。2、操作温度过高：确保全程冰上操作，离心机预冷至4℃。
