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百泰派克

肽段覆盖率/肽谱图分析

蛋白样品鉴定过程一般只会使用Trypsin对蛋白进行酶切,鉴定到的肽段覆盖率大概在60%。为了得到靶蛋白的全部序列信息,百泰派克公司会选用在蛋白鉴定过程中常用的6种蛋白酶(Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N)分别对靶蛋白进行酶切和鉴定,在得到更多的碎裂肽段片段的同时,经过肽段之间的拼接完成蛋白序列100%的测定。百泰派克公司应用现有的质谱技术平台,提供出以LC-MS/MS为基础的的肽谱图分析,此分析可以用于确认重组蛋白是否得到完整表达,检测重组蛋白表达过程是否发生断裂。主要用于蛋白质一级结构的确认,通过使用多种蛋白质酶切反应和液质联用技术对肽段的测序,结合专有的分析软件,能对任何非特异性蛋白酶酶解产物的质谱数据进行分析。从而实现对所测定靶蛋白序列100%的覆盖。

质谱法肽段覆盖率/肽谱图全序列测定的流程:

• 首先使用6种蛋白酶(Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N)分别对靶蛋白进行酶切和鉴定
• 接着使用nano LC-MS/MS或者UV LC-MS/MS 对样品进行分析
• 将得到的肽段覆盖率/肽谱图全序列与您提供的理论序列进行比对
• 得到比对结果

质谱法肽段覆盖率/肽谱图全序列测定的优点:

(1)特异性及非特异性蛋白质酶的组合,可实现对任何蛋白质(多肽)的鉴定达到100%的覆盖率。
(2)每个肽段的确认包括:1)基于样品的质量2)基于样品的MS/MS指纹图谱,所以比仅使用一级质谱进行测定更准确。

样品要求:

胶内样品和溶液样品均可以用来进行上述测序
样品纯度越高越好,建议超过80%的蛋白质
需要的靶蛋白样品量:10-20ug
蛋白质胶样品也可用于肽段覆盖率测定,但需对样品进行特殊的前处理。

案例分析:

蛋白样品100%序列验证服务

在实际的实验过程中,按照尽量提高效率和降低花费的原则,我们会首先对客户提供的理论序列进行分析,分析过程是按照几种不同的蛋白酶酶切位点进行肽段覆盖率的预测,假如可以仅仅通过3种蛋白酶酶切就可以100%的覆盖全序列,实际实验过程就会先用这3种蛋白酶进行酶切和后续的序列分析实验,这样可以有效的降低实验的成本。以下是之前项目的部分数据,该项目中客户按照理论序列表达抗体药物,一级序列需要进行验证,以证明表达得到的抗体与理论序列一致,部分实验数据展示如下:

结题报告中,我们会按照下图所示的方式给出肽段覆盖率的详细数据。

中/英文项目报告

在技术报告中,百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告,报告包括:

1. 实验步骤(中英文)
2. 相关的质谱参数(中英文)
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 生物药物肽段覆盖率信息

生物药物肽段覆盖率测定一站式服务

您只需下单-寄送样品
百泰派克一站式服务完成:样品处理-上机分析-数据分析-项目报告

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