Pro A N-糖试剂盒（荧光&质谱增强型）

糖基化是蛋白质最常见的翻译后修饰之一，尤其是N连接型糖基化（N-glycosylation），广泛存在于分泌蛋白和膜蛋白中。N-糖结构的微小差异可能导致蛋白质功能、稳定性、免疫原性及生物活性的显著变化。因此，N-糖的准确检测和分析在生物药研发、生物标志物研究、疾病机制探索及质量控制中具有重要意义。

 

Pro A N-糖试剂盒是一种用于快速释放和标记蛋白质N-糖链的试剂盒，适用于生物制药等多领域的糖基化分析。该试剂盒通过PNGase F酶释放N-糖链，并使用ProA标记试剂对糖链进行荧光标记，便于通过液相色谱（HPLC）和质谱（MS）进行检测。

 

产品详情

百泰派克生物科技推出的Pro A N-糖试剂盒是一款集N-糖高效标记、信号增强与广泛平台兼容性于一体的样品前处理试剂盒。该产品采用优化设计的Pro A标记分子，具有良好的荧光特性，并可显著提升质谱离子化效率，适用于UPLC-FLD、HILIC-LC-MS/MS等多种分析平台。无论您是从事基础研究还是药物质量控制，该试剂盒均可为您的N-糖分析提供有力支持。

 

试剂盒组分

产品组分	规格	储存条件
PNGase F	100 µL/支	2-8℃
酶切缓冲液（7.5×）	200 µL/支	2-8℃
加强型酶切缓冲液（7.5×）	200 µL/支	2-8℃
Pro A溶液	500 µL/支	-20℃
还原剂溶液	500 µL/支	-20℃
纯化用磁珠	10 mL/瓶	2-8℃
洗脱液	2 mL/支	2-8℃
洗涤缓冲液	40 mL/瓶	2-8℃

 

使用流程

整个标记流程经过百泰派克生物科技团队优化设计，适用于常规实验室操作流程，主要步骤如下：

 

1、样品酶切

本试剂盒包含两种酶切方式，即非变性酶切和变性酶切，主要区别于有些N-糖位点在非变形条件下很难进行酶切释放，需使用加强型酶切缓冲液对其进行酶切。

（1）非变性酶切

将样品用水稀释至5mg/mL，取24µL稀释后的样品加入4µL酶切缓冲液，再加入2µL PNGase F，混匀，在50℃下酶切5min，然后在98℃下变性5min。在≥14000rpm下离心3-5min，取出25µL上清液放置于新的EP管中。

（2）非变性酶切

将样品用水稀释至5mg/mL，取24µL稀释后的样品加入4µL加强型酶切缓冲液，混匀，在在98℃下变性3min，再加入2µL PNGase F，混匀后于50℃下酶切5min，然后在98℃下变性5min，恢复室温后将样品离心至管底。

2、ProA标记

在离心时，同时制备标记液。将Pro A溶液、还原剂溶液和甲酸溶液按照2:2:1的体积比配置成标记液，混匀后，取25µL加入上述25µL上清或30µL酶切液中混匀，在50℃下孵育15min。针对不同数量的样品，标记液配比体积可根据实验适当调整。

 

3、磁珠纯化

（1）结合

取出纯化用磁珠，震荡混匀后吸取200µL磁珠溶液，加入EP管中，置于磁力架上，待溶液澄清后将液体小心吸弃。

将EP管从磁力架上移出，将50或55µL标记混合液装入有磁珠的EP管，吹打混匀。

加入385µL乙腈，吹打3-4次混匀。

 

（2）洗涤

将EP管放置于磁力架上，约半分钟待溶液澄清后将液体吸弃。将EP管从磁力架上移出，加入400µL洗涤缓冲液，吹打混匀。将EP管再次放置于磁力架上，约半分钟待溶液澄清后将液体吸弃。

重复上述洗涤步骤一次。

 

（3）洗脱

将EP管从磁力架上移出，加入40µL洗脱液，吹打混匀，室温孵育2-3min。放置于磁力架上，约半分钟待溶液澄清后，小心吸取40µL上清液至新的EP管中，并加入60µL乙腈混匀。在≥14000rpm下离心3min后取出上清液到上样瓶中。

 

注：液体加入建议沿磁珠所在管壁侧在磁珠上方打入，从而顺利将磁珠冲到管底。

产品优势

1、荧光和质谱双模式增强

Pro A标记物设计兼顾荧光检测和质谱响应，适用于多种分析平台，一次标记，多种用途。

 

2、标记效率高、背景干扰低

反应效率高，副反应少，减少非特异信号，保障下游定量准确性。

 

3、反应温和、样品兼容性广

标记反应在温和条件下进行，适用于多种来源的游离N-糖样品。

 

4、稳定性强，适合长期保存和批量分析

标记产物具备良好稳定性，可在后续分析前冷藏保存，有利于实验计划安排与质量控制。

 

应用

本试剂盒可在多种研究和应用领域中发挥作用，包括但不限于：

 

1、生物药糖基化分析

用于单克隆抗体（mAb）和融合蛋白等生物药品的N-糖结构特征分析与质量一致性评估。

 

2、疾病相关糖组学研究

研究肿瘤、炎症、感染等疾病中的N-糖表达变化，寻找潜在生物标志物。

 

3、疫苗与糖抗原开发

分析病毒、细菌或寄生虫表面糖链结构，支持疫苗设计与功能验证。

 

4、天然产物与糖类生物工程

探索植物、微生物来源的糖类化合物结构与活性关系，用于新型功能糖筛选。

 

5、糖转移酶功能验证与底物筛选

与体外糖基化反应结合，监测酶促反应产物的糖链变化，提高底物筛选效率。