2-AB N-糖试剂盒（荧光增强型）

N-糖链（N-glycan）是糖蛋白上最常见的一类糖基化修饰，在调节蛋白质折叠、稳定性、细胞通讯以及免疫识别等方面发挥着重要作用。N-糖结构的微小变化常与多种疾病状态密切相关，如肿瘤、感染、自身免疫疾病及神经退行性病变等。因此，对游离N-糖的高灵敏度、准确检测是糖生物学与临床转化研究的关键环节。

 

然而，N-糖本身缺乏强烈的天然信号，无法直接被荧光检测或在质谱中高效离子化。为了提高检测灵敏度与分离效率，通常需要通过化学衍生方法对糖链进行预标记处理。2-AB（2-aminobenzamide，2-氨基苯甲酰胺）标记是目前应用最广泛的游离N-糖衍生化技术之一，可显著增强糖链的荧光信号，使其在UPLC、HPLC等平台上实现高灵敏检测和定量，同时也兼容部分质谱分析应用。

 

产品详情

百泰派克生物科技的2-AB N-糖试剂盒是专为糖链衍生化设计的荧光标记产品，通过即用型试剂、优化反应体系与标准化流程，大幅降低操作门槛、提高标记效率与数据一致性，为N-糖检测实验提供更加高效、可靠的工具。无论您专注于生物药质量控制、疾病机制研究还是基础糖链结构解析，该产品均可为您的实验带来实质性的便利与效益。

 

试剂盒组分

使用流程

整个标记流程经过百泰派克生物科技团队优化设计，适用于常规实验室操作流程，主要步骤如下：

 

1、样品酶切

2-AB N-糖试剂盒包含两种酶切方式，即非变性酶切和变性酶切，主要区别于有些N-糖位点在非变形条件下很难进行酶切释放，需使用加强型酶切缓冲液对其进行酶切。

（1）非变性酶切

将样品用水稀释至5mg/mL，取24µL稀释后的样品加入4µL酶切缓冲液，再加入2µL PNGase F，混匀，在50℃下酶切5min，然后在98℃下变性5min。在≥14000rpm下离心3-5min，取出25µL上清液放置于新的EP管中。

 

（2）非变性酶切

将样品用水稀释至5mg/mL，取24µL稀释后的样品加入4µL加强型酶切缓冲液，混匀，在在98℃下变性3min，再加入2µL PNGase F，混匀后于50℃下酶切5min，然后在98℃下变性5min，恢复室温后将样品离心至管底。

 

2、2-AB标记

在离心时，同时制备标记液。将2-AB溶液、还原剂溶液和甲酸溶液按照2:2:1的体积比配置成标记液，混匀后，取25µL加入上述25µL上清或30µL酶切液中混匀，在50℃下孵育15min。针对不同数量的样品，标记液配比体积可根据实验适当调整。

 

3、磁珠纯化

（1）结合

取出纯化用磁珠，震荡混匀后吸取200µL磁珠溶液，加入EP管中，置于磁力架上，待溶液澄清后将液体小心吸弃。

将EP管从磁力架上移出，将50或55µL标记混合液装入有磁珠的EP管，吹打混匀。

加入330µL乙腈，吹打3-4次混匀。

 

（2）洗涤

将EP管放置于磁力架上，约半分钟待溶液澄清后将液体吸弃。将EP管从磁力架上移出，加入400µL洗涤缓冲液，吹打混匀。将EP管再次放置于磁力架上，约半分钟待溶液澄清后将液体吸弃。

重复上述洗涤步骤一次。

 

（3）洗脱

将EP管从磁力架上移出，加入40µL洗脱液，吹打混匀，室温孵育2-3min。放置于磁力架上，约半分钟待溶液澄清后，小心吸取40µL上清液至新的EP管中，并加入60µL乙腈混匀。在≥14000rpm下离心3min后取出上清液到上样瓶中。

 

注：液体加入建议沿磁珠所在管壁侧在磁珠上方打入，从而顺利将磁珠冲到管底。

 

产品优势

1、即用型配置

关键组分已预配，无需自行配制反应体系，简化操作流程，减少误差。

 

2、平台兼容性强

标记产物适用于UPLC、HPLC等主流色谱平台，也适配糖链数据库及谱图库识别分析。

 

3、反应条件温和、效率高

标记反应在适中温度下快速完成，适合多种糖链结构，不易引发降解或副反应。

 

4、适合多样化样品类型

可用于细胞、血清、组织样品中提取的糖链，满足基础研究与药物开发的多样需求。

 

5、实验重现性高

经内部质控验证，标记效率与检测信号一致性良好，有助于多批次样品对比分析。

 

应用

2-AB N-糖试剂盒可广泛应用于生物医药研发、基础科研及生物分析等多个领域，包括但不限于：

 

1、抗体类药物糖基化结构表征

标记分析单克隆抗体或融合蛋白的N-糖结构，辅助药品一致性评估与质量控制。

 

2、疾病生物标志物筛选

比较不同疾病状态下血清、细胞、组织样品中的糖链表达模式，发现潜在生物标志物。

 

3、糖链生物工程研究

评估基因工程改造细胞生产的糖链产物结构，用于糖合成路径优化。

 

4、基础糖组学与系统生物学

探索不同物种、组织、发育阶段中的糖链分布及其生物学功能。