质谱法测蛋白相对分子质量

蛋白质分子量是蛋白质的一个重要特征参数。质谱法可以用于蛋白质分子量的测量鉴定,质谱结合液相色谱可以用于蛋白混合物分子量的测定。百泰派克生物科技提供基于质谱的蛋白质分子量测定服务。

质谱法测相对分子质量

质谱法测蛋白相对分子质量是利用质谱技术对蛋白质的分子量进行测定。目前,广泛使用于蛋白质分子量分析的质谱主要有两种类型:一种是MALDI-TOF,结合了MALDI离子化技术和TOF质谱技术,可以直接对分子量进行测定;另一种是ESI-MS,结合了电喷雾电离ESI和质谱技术,使用高分辨率质谱分析电喷雾得到多电荷信号,然后对信号进行去卷积分析,获得精确的分子量数值。这两种方法各有其优点及适用的领域。MALDI离子化效率非常高,可以对极微量的样品进行分析。ESI可以产生多电荷峰,可以获得准确的离子分子质量。更详细的比较见下图。

高分辨质谱测分子量

高分辨质谱测分子量

单抗质谱分子量检测

单抗即单克隆抗体,是指由单克隆细胞产生的抗体。抗体属于蛋白质,单抗质谱分子量检测是用质谱技术检测单抗蛋白质的分子量。因此,同其他蛋白质一样,单抗分子量可以用MALDI-TOF和ESI-MS等质谱技术进行检测。基质辅助激光解吸电离(MALDI)与电喷雾电离(ESI)都是在质谱中使用的软电离技术,与ESI相比MALDI产生的多电荷离子更少,不需要额外的去卷积步骤即可对蛋白样品进行分析。然而,对于分子量较大的蛋白质,平均质量与准确质量差别很大,所以大于25kDa分子量的蛋白质类物质分子量鉴定推荐高分辨率质谱ESI-MS鉴定策略。而单克隆抗体主要由两条轻链和两条重链组成,分子量一般约在150kDa左右,因此单抗分子量检测一般采用ESI-MS。

混合物的分子量测量

混合物的范围较为宽泛,这里主要介绍蛋白质混合物的分子量测量。蛋白质混合物包括蛋白质与蛋白质或蛋白质与非蛋白质的混合物。因为质谱检测对样品的纯度要求较高,特别是在只用一级质谱的时候,所以用质谱法对蛋白质混合物的分子量进行测量时需要先通过分离技术把混合物分离成为简单的较纯的组分后,再对每一组分中物质的分子量进行测定,在蛋白质分子量测定中,常用的分离技术为高效液相色谱(HPLC)。混合物样品首先会经过高效液相色谱分离,分离后的不同组分再进入质谱进行分子量测定。利用液相色谱结合串联质谱(MS/MS)可以更高效灵敏地检测混合物蛋白质的分子量。

相关服务

蛋白分子量测定

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