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百泰派克

蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定

百泰派克生物结合MALDI-TOF质谱系统与LC-MS/MS质谱系统,提供专业准确的蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白鉴定服务。可鉴定的样品包括:1D-SDS PAGE分离的蛋白胶条,2DE PAGE中的蛋白胶点,蛋白表达产物,免疫共沉淀(Co-IP)样品。其中,蛋白质样品的鉴定前处理过程严格按照Nature Methods发表的文章:Universal sample preparation method for proteome analysis进行,保证鉴定试验中得到更高的肽段覆盖率。质谱鉴定的原理则是基于鸟枪法(Shot-gun):将蛋白条带或者蛋白溶液酶切成肽段混合物,经高效液相色谱分离得到若干较为简单的组分,进入高分辨率质谱仪中进行分析。检索软件根据二级质谱信息与相应的数据库比对,结合匹配度打分及错配过滤,可得到肽段的确切序列,进而拼接出各蛋白的完整序列,从而实现对蛋白的鉴定。

蛋白质质谱鉴定流程

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基于鸟枪法(shot-gun)LC-MS的蛋白鉴定流程

关于样品

1D SDS PAGE /2D PAGE gels样品:
1. Coomassie Blue, SYPRO Ruby 以及Silver stain样品均可进行蛋白的鉴定试验;
2. 银染的样品有可能与后续的质谱分析不兼容,我们推荐您使用下面的产品或者实验步骤进行银染实验:
ProteoSilver Plus, Sigma (Product # PROTSIL1 or PROTSIL2)
Dodeca Silver Stain, BioRad (Product # 161-0481 or 161-0480)
3. 银染的样品请不要进行脱色处理

液体样品(In solution format):
1. 假如样品中蛋白量>10ug,我们对样品的缓冲体系没有要求;
2. 假如样品中蛋白量<10ug,样品准备过程中尽量减少SDS等表面活性剂的使用,并注意降低盐浓度;
3. 提交样品过程中,注意提供样品的缓冲体系和样品中蛋白的预估含量;

Co-IP样品:
1. 如果您洗脱的样品需要跑胶,请按照1D SDS PAGE样品准备要求准备样品即可;
2. 如果您直接提交洗脱样品,我们推荐使用HPH EB (0.5 M NH4OH, 0.5 mM EDTA) 缓冲体系进行蛋白洗脱,保证洗脱缓冲体系与后续的质谱实验兼容;

样品运输:
1. 我们推荐您将样品冻干后进行运输,冻干样品中蛋白非常稳定。
2. 液体样品推荐干冰运输,短途运输冰袋也可以。

注意事项: 利用质谱进行蛋白样品的鉴定,在样品准备过程中需佩戴手套和头套,尽量避免自身角蛋白(keratin)对样品的污染。

研究案例

该项目是中国科学院生物物理所一位老师将她的Co-IP的样品寄给我们进行蛋白鉴定。得到的部分结果如下图所示:

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蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白鉴定研究案例

从图中客户看出,我们提供的结果报告中包含鉴定到的蛋白的Accession Number, Peptide coverage, 鉴定出的肽段信息,鉴定出的肽段的修饰信息以及对鉴定到的蛋白的详细描述。

中/英文项目报告:

在技术报告中,百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告,报告包括:

1. 实验步骤(中英文)
2. 相关的质谱参数(中英文)
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 鉴定的蛋白质详细信息

蛋白胶点、胶条、IP样品质谱鉴定一站式服务

您只需下单-寄送样品
百泰派克一站式服务完成:样品处理-上机分析-数据分析-项目报告

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