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N-糖分析服务

糖基化主要是指将聚糖连接到蛋白质、脂质或其他有机分子上的酶促过程,是最常见的蛋白质翻译后修饰(PTM)。由于连接的聚糖的复杂性和同量异位性质,糖基化分析十分具有挑战性。随着蛋白质治疗剂在临床实践中的应用不多增多,如单克隆抗体、糖蛋白、激素、细胞因子和凝血因子,蛋白质N-糖基化(也称作N聚糖,N糖)的检测受到越来越广泛的关注。

百泰派克不同生物内产生的不同类型的N-聚糖
不同生物内产生的不同类型的N-聚糖

N糖(N-Glycan)是一种含有Man3-GlcNAc2的寡糖结构,它们通过末端N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺的NH2基团之间的糖苷键与蛋白质的多肽链连接。大多数聚糖分析的样品制备步骤包括糖蛋白的消化、去糖基化、纯化、标记/衍生化和SPE。根据样品的特性,也可以使用其他步骤和技术进行样品制备。

百泰派克N糖链分析的一般流程(以抗体为例)
N糖链分析的一般流程(以抗体为例)

可利用MALDI TOF MS和/或UHPLC技术,对聚糖及其种类进行分析。

基于MALDI-TOF MS技术的N聚糖分析

MALDI-TOF对糖基化化合物的结构表征具有很高的灵敏度,且可实现高通量检测。在对混合物N糖进行分析时,MALDI通过单电荷离子的形成对样品进行分析,而不是电喷雾电离进行分析。使用N-糖苷酶A或F酶促反应,释放样品的N糖后,将样品甲基化后进行检测。

基于质谱的N糖链分析
基于质谱的N糖链分析

基于HILIC-UHPLC MS技术的N糖谱(N-Glycan profiling)分析

基于LC-MS的N糖分析是现在的主流分析方法,亲水相互作用色谱法(HILIC)可用于N糖分析,PNGase F酶促反应释放的N糖,利用2-氨基苯甲酰胺(2-AB) 对释放所得的糖链进行衍生化,对衍生后的糖链进行测定,可用于大量样本N糖的分析。在进行荧光标记之前,如果存在大量可能干扰衍生化反应的去污剂、非挥发性盐或带有游离氨基的物质,可通过TSK Amide-80色谱柱对N糖进行纯化。标记后的N糖通过HILIC-UHPLC MS进行分析。

百泰派克生物科技利用HILIC色谱柱进行N-聚糖分析的常规流程
利用HILIC色谱柱进行N-聚糖分析的常规流程

百泰派克生物科技在糖组学领域拥多年分析服务经验,可根据您的具体需求量身定制糖组学分析服务。欢迎咨询!

中/英文项目报告

在技术报告中,百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告,报告包括:

1. 实验步骤(中英文)
2. 相关的质谱参数(中英文)
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 蛋白质分子量和纯度分析结果

N-糖分析一站式服务

您只需下单-寄送样品
百泰派克一站式服务完成:样品处理-上机分析-数据分析-项目报告

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