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蛋白质N端测序技术

蛋白质表达起始于N端,蛋白质N端序列对于蛋白的功能、蛋白稳定性、以及在细胞中的定位都有着重要作用,因此蛋白质N端序列分析能为蛋白质功能、定位等研究提供重要依据。

测序原理

I、Edman降解测序法

蛋白质表达起始于N端,蛋白质N端序列对于蛋白的功能、蛋白稳定性、以及在细胞中的定位都有着重要作用,因此蛋白质N端序列分析能为蛋白质功能、定位等研究提供重要依据。蛋白质Edman测序流程

Edman测序循环包括3步:
1. 在碱性条件下,PITC与蛋白N端的游离氨基结合
2. 在酸性溶液中,N端残基被切除
3. PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH残基,经过在线的HPLC分析,根据洗脱时间不同,从而确定氨基酸种类。

II、质谱测序法

蛋白质质谱测序流程

质谱测序原理是将蛋白质经胰蛋白酶酶切后,直接用串联质谱测定酶切肽段混合物,然后通过一级质谱选择N端肽段离子进行串联质谱分析而得到N端序列。能够对混合蛋白、末端封闭或糖基化的蛋白质进行测序。

测序平台

SHIMADZU PPSQ-33A测序仪

SHIMADZU PPSQ-33A测序仪

平台优势
• 高灵敏度检测PTH-氨基酸
• UV-VIS探测器SPD-20A
• 稳定分析微量样品
• 准确区分分子量相近的氨基酸(I/L、Q/K)


Obitrap Fusion Lumos质谱仪

Obitrap Fusion Lumos质谱仪


平台优势
• 分辨率高达 500,000 FWHM
• 高容量离子传输管
• 超低检测限的电动离子漏斗
• 高清ETD,显著增加碎片离子覆盖率
测序亮点

• 可测定多种形式的样品:蛋白溶液、PVDF蛋白条带
• 仅需1-10 ug蛋白样品即可完成检测
• 可测定蛋白N端多达70个氨基酸序列
• 全自动序列分析,序列分析更准确
• 测序不受N端封闭,PEG和糖基化等N端修饰的影响


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